大鼠三碘甲状腺原氨酸(T3)ELISA检测试剂盒
简介
三碘甲状腺原氨酸(T3)是一种甲状腺激素。T3及其原激素甲状腺素（T4）的生产由甲状腺刺激素（TSH）激活，TSH由垂体前叶释放。这一途径是一个闭环反馈过程的一部分。血浆中T3和T4的浓度升高，抑制了垂体前叶的 TSH 的产生。它是真正的荷尔蒙。它对目标组织的影响大约是T4的四倍。在产生的甲状腺激素中，只有大约 20%是T3，而80%是T4。T3的半衰期约为2.5天。
检测原理
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被偶联抗原，样本中T3和微孔条上预包被的偶联抗原竞争T3抗体，加入酶标二抗后，形成包被抗原-抗体-酶标二抗复合物。随后结合的酶催化TMB底物显色，样本吸光值与其含有的T3成负相关。通过标准曲线可准确定量样品中T3的含量。通过标准曲线计算所得值乘以样品处理的稀释倍数即为实际样品中T3的含量。
试剂盒组成及保存条件
检测实验的局限性
本试剂盒仅供科研使用，不能用于临床诊断或治疗。
1. 试剂盒的使用期限不得超过试剂盒标签上的有效期。不要将试剂与其他批次或来源的试剂混合使用或替换使用。
2. 如果样品产生的值高于最高标准，则用测定稀释剂进一步稀释样品，并重复测定。稀释剂、实验员、移液技术、洗涤技术、培养时间或温度以及试剂盒使用年限的任何变化都可能导致结果变化。
3. 样本采集、处理和存储的变化可能会导致样本值的差异。
4. 本试剂盒实验设计消除了不同生物样品中可能潜在的干扰因素的影响，但并不能涵盖所有潜在影响因素。不能排除存在其他干扰的可能性。
操作要点及注意事项
1. 混合蛋白质溶液时，应始终避免起泡。为了避免交叉污染，在添加每个标准品、样品和试剂时应更换移液器枪头。此外，每种试剂应单独使用容器。
2. 确保试剂不间断地添加到板孔中。为了确保准确的结果，在孵育步骤中需要粘合好封板膜。
3. 当使用自动洗板机时，在加入洗涤缓冲液后加入30秒的浸泡期，或者在洗涤步骤之间将板旋转180度，可以提高测定精度。
4. 显色剂应保持无色，直到添加到板中。确保显色剂不受光线照射。显色剂应从无色变为蓝色。
5. 应按照与显色剂相同的顺序将终止液添加到板中。加入终止液后，孔中形成的颜色将从蓝色变为黄色。绿色的孔表示终止液未与基质溶液充分混合。
6. 此试剂盒提供的终止液为稀硫酸溶液，具有一定腐蚀性，应谨慎操作。
7. 该试剂盒中的某些成分含有防腐剂，可能会引起皮肤过敏反应，应佩带口罩避免吸入薄雾。
8. 显色剂B可能会引起皮肤、眼睛和呼吸道刺激，应佩带口罩避免吸入薄雾。
9. 佩戴防护手套、防护服、眼睛和面部防护用品。处理后彻底洗手。
需要的其他材料
1. 酶标仪，包含450nm测定波长，同时包含600-680nm校正波长更佳；
2. 移液器及枪头；
3. 蒸馏水或去离子水
4. 100-1000 mL刻度量筒。
5. 洗瓶、排枪或自动微孔板清洗机。
6. 水平轨道微孔板振荡器，能够保持500±50 rpm的速度。
7. 用于稀释标准品和样品的试管。
实验步骤
所有标准品、样品建议复孔检测
1. 酶标板准备：确定试验所需要的孔数，取下未使用的酶标条放回装有干燥剂的铝箔袋。
2. 样本孵育：每孔分别加入50μL不同浓度的标准品/预处理过的待测样品，同时加入一抗试剂50µL/孔（加一抗试剂时请使用多道移液器），盖上封板膜在37℃下孵育30分钟。孵育结束后，每孔加入300μL 1×洗涤缓冲液，轻轻晃动30秒，甩干并在纸上拍干，以这种方式清洗3次。
3. 二抗孵育：每孔加入100μL酶标二抗工作液，轻轻混匀，盖上封板膜在37℃下避光孵育30分钟。孵育结束后，重复步骤1中的清洗方式清洗4次。
4. 底物显色：每孔首先加入50μL显色液A，随后加入50μL显色液B，轻轻混匀，盖上封板胶纸，37℃避光反应15分钟。
5. 终止反应：待显色反应结束后，每孔加入50μL终止液，轻轻混匀，5分钟内用预热完成的酶标仪在450nm处测吸光值。
精密度
批内精密度：
三组已知的高、中、低浓度样品，进行二十次在同一个板块内精度评估。
批内变异系数 CV%小于10%。
批间精密度：
三组已知的高、中、低浓度样品，进行二十次在不同板块内精度评估。
批间变异系数 CV%小于15%。
回收率
样本回收率：80%-120%。
灵敏度
经样本测试，本试剂盒的检测灵敏度为0.01ppb。
线性关系
校准品剂量反应曲线相关系数r值，大于等于0.998。
特异性
T3：100%。
