单宁含量检测试剂盒 ; 50管/48样
测定意义：
单宁是一类广泛存在于植物体内的多元酚化合物，又称植物多酚。具有独特的化学性质和多种生理活性，如能与蛋白质、生物碱、多糖结合；能与多
种金属离子发生络合或静电作用；具有止血、抑制微生物、抗过敏、抗突变、抗肿瘤、抗衰老等生理活性。
测定原理：
单宁在碱性环境下与磷钼酸反应，生成蓝色化合物，在 760nm 处有最大吸收峰。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵和蒸馏水。
试剂一：液体 10 mL× 1 瓶，4℃保存；
试剂二：液体 8 mL × 1 瓶，4℃保存；。
单宁的提取测定步骤：
按照组织质量（g）：蒸馏水体积(mL)为 1 ：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 蒸馏水），充分匀浆后转移到 EP管中，80℃水浴提
取 30min ， 8000 g ，25℃离心 10 min，取上清液待测。确保试剂不间断地添加到板孔中。为了确保准确的结果，在孵育步骤中需要粘合好封板
膜。
测定步骤：
1 、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 760nm，蒸馏水调零；试剂一和试剂二 37℃预热 10min 以上；
2、操作表：
试剂名称(µL） | 对照管 | 测定管 |
样本 | | 25 |
蒸馏水 | 675 | 650 |
试剂一 | 175 | 175 |
混匀 ，室温静置 5min |
试剂二 | 150 | 150 |
混匀 ，室温静置 30min ，760nm 处读取吸光值 A ，ΔA =A 测定-A 对照 ，对照管只要做一管。 |
单宁含量计算：
1 、标准条件下：
测定的回归方程为:
y = 1.6418x +0.0134；x 为标准品浓度(mg/mL) ，y 为ΔA(A 测定-A 对照)。
2、按样本鲜重计算：
单宁含量（mg /g 鲜重）= [(ΔA-0.0134) ÷1.6418×V1]÷（W×V1÷V2）=0.609×(ΔA-0.0134) ÷W。
3、按样本蛋白浓度计算：
单宁含量(mg/mg prot)= [(ΔA-0.0134) ÷1.6418×V1]÷(V1×Cpr)=0.609×(ΔA-0.0134) ÷Cpr。
V1：加入样本体积，0.025mL；V2：加入提取液体积，1mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。
注 意：
1 、 ΔA 控制在 0.02-0.8 范围内，若ΔA 大于 0.8，将样本提取上清液用蒸馏水稀释 10 倍后检测，计算公式中乘以相应稀释倍数。
2 、标准曲线线性范围为：0.025mg/mL-0.5mg/mL。
