环磷酸腺苷(cAMP)含量检测试剂盒 ; 50管/48样
测定意义：
磷酸腺苷（Adenosine 3’ ，5’-cyclic monophosphate ，cAMP）是一种重要的具有生物活性的环核苷酸类物质，广泛存在于生物体内。cAMP 作为生命信息传递的“第二信使 ”，不仅参与机体多种酶的代谢过程，对细胞的分裂、分化和发育起着重要的调节作用，而且还可调节基因转录和翻译，影响蛋白质合成。
测定原理：
cAMP在254 nm 下有吸收峰，可以利用高效液相色谱法测定其含量。
需自备的仪器和用品：
高效液相色谱仪、低速离心机、溶剂抽滤装置、氮吹仪、涡旋振荡器、针头式过滤器（水系，50 个，0.22μm）、滤膜（水系和有机系各 1个，0.45μm）、C18 柱（耐水，4.6 ×250 mm）、可调式移液器、样品瓶（50个，2 mL）、内衬管（50个，放置在样品瓶内用于微量样品进样）、甲醇（色谱级，200 mL）和超纯水。
试剂的组成和配制：
试剂一：粉剂一支，25℃保存；
试剂二：液体 60 mL×1瓶，4℃保存；
试剂三：cAMP 标准品 1.0 mg×1支，-20℃保存。
实验前的准备工作：
1、将超纯水 1000 mL 和甲醇 200 mL 用 0.45 μm 的滤膜抽滤，以除去溶剂中的杂质，防止堵塞色谱柱。（注：超纯水用水系滤膜抽滤，甲醇用有机系滤膜抽滤）。
2、流动相的配制：量取 900 mL 超纯水，加入 1.22 g 试剂一，混匀溶解。将甲醇和加入试剂一的超纯水按照 10 ：90 的比例配成流动相，可取 100 mL甲醇和 900 mL 超纯水混合，混匀。
3、将配好的流动相超声 30 分钟，以脱去溶剂中的气泡，防止堵塞色谱柱。
cAMP 的提取：
组织的处理：取 0.1 g 组织，加入 1 mL 试剂一，冰浴匀浆，转移到 1.5 mL 有盖离心管中，涡旋 1 min ，50 ℃水浴 1 h 并且震荡 3~4 次， 8000g 离心 10 min，取上层液体至 1.5 mL 离心管中，氮气吹干，加入 0.2 mL 超纯水，涡旋震荡溶解，用针头式过滤器过滤后待测。
标准品的配制：
在试剂三中加入 1mL 超纯水，配成 1mg /mL母液，将母液用超纯水分别稀释成 200 μg/mL,150μg/mL,100μg, /mL50μg /mL 和10μg/mL的cAMP标准品溶液。针头式过滤器过滤后待测。
cAMP 含量测定操作步骤：
1. 开启电脑、检测器和泵，安装上色谱柱，打开软件，在方法组中设置进样量10μL，流速 0.8 mL/min，柱温30 ℃,测试时间 45 min，检测波长 254 nm，设置完毕保存方法组。
2. 用流动相过柱子，待基线稳定后开始加样。
3. 加入标准品10μL，在45min内可分离cAMP ，cAMP的保留时间在35 min 左右（柱子不同，保留时间有差异）,计算不同浓度的 cAMP 标准品的峰面积。
4. 加入样品10μL,在相应保留时间处检测cAMP的峰面积。
cAMP 含量的计算：
以标准品浓度(μg/mL）为横坐标，峰面积为纵坐标计算 cAMP 标准曲线。将样品峰面积代入标准曲线，计算样品 cAMP 含量。
注意事项：
1、本试剂盒检测限为1ug/mL，若 cAMP 含量低于该浓度需要对样品浓缩，或选择 cAMP含量 ELISA 试剂盒进行测定。
2、为了避免使用过程中柱压过大，流速由小到大调节。
3、使用完毕时，先以 20%甲醇水溶液冲洗色谱柱 1 h，再用纯甲醇洗色谱柱30min。
4、标准品的稀释倍数要根据样品中cAMP浓度确定，样品中cAMP的峰面积必须落在不同浓度的cAMP标准品的峰面积之内，该标准品稀释倍数只是一个参考。
