H2S含量检测试剂盒 ; 50管/48样
测定意义:
H²S 是一种新型气态信号分子,存在于脑内的神经递质,生理浓度的 H²S 对神经系统海马的长时程增强功能具有重要的调节作用,并对自发性高血压、出血性休克及肝硬化等疾病的过程发挥着重要的病理生理效应。H²S 与醋酸锌、N, N-二甲基对苯二胺和硫酸铁铵等反应生成亚甲基蓝,亚甲基蓝在 665nm 处有最大吸收峰,通过测定其吸光值可计算 H²S 含量。
测定原理:
H²S 与醋酸锌、N, N-二甲基对苯二胺和硫酸铁铵等反应生成亚甲基蓝,亚甲基蓝在 665nm 处有最大吸收峰,通过测定其吸光值可计算 H²S 含量。
自备实验用品及仪器:
天平、低温离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 32mL×1 瓶,4℃保存。
试剂三:液体 16mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂四:液体 16mL×1 瓶,4℃保存。
试剂五:液体 2.5mL×1 瓶,4℃避光保存。
样品处理:
1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1 :5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液)进行冰浴匀浆,然后 10000g ,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2. 细菌、真菌:按照细胞数量(10⁴ 个):提取液体积(mL)为 500~1000 :1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 提取液), 冰浴超声波破碎细胞(功率 300w ,超声 3 秒, 间隔 7 秒,总时间 3min); 然后10000g ,4℃ , 离心 10min,取上清置于冰上待测。
3. 血清(浆):直接测定
操作表:(取 2 mL 离心管,按照下表操作):H²S 计算公式:
| 空白管 | 测定管 |
样本(μL) | | 600 |
H²O (μL) | 600 | |
试剂一 (μL) | 600 | 600 |
充分震荡混匀 |
试剂二(μL) | 600 | 600 |
10000g ,4℃, 离心 10min,去上清,留沉淀 |
H²O (μL) | 600 | 600 |
10000g ,4℃, 离心 10min,去上清,留沉淀 |
试剂一 (μL) | 300 | 300 |
试剂三(μL) | 300 | 300 |
充分震荡混匀 |
试剂四(μL) | 300 | 300 |
10000g ,4℃, 离心 10min ,取 800μL 上清加入 1mL 玻璃比色皿 |
试剂五(μL) | 40 | 40 |
混匀,25℃静置 5min ,测定 665nm 吸光值,记为 A 测定和 A 空白,ΔA=A 测定-A 空白。 |
H²S 计算公式:
标准曲线回归方程为:y = 0.0044x ,R²= 0.9988
(1)组织样品
a. 按照蛋白浓度计算

b. 按照样本重量计算
H²S
V反总÷(V 样÷V 样总×W)= 340.9× ΔA÷W
(2)液体样品

( 3 ) 细胞
H²S V 反总÷(V 样÷V 样总×细胞数量(万个))=340.9×ΔA÷细胞数量(万个)
V 反总:反应总体积,0.9mL;V 样:反应中样品体积,0.6mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;W:样品质量,g;Cpr:蛋白浓度,mg/mL
注意事项:
最低检出限为 1nmol/mL。