NAD苹果AD酸酶(N-ME)检测试剂盒 ; 100管/96样
测定意义：
ME 广泛存在于微生物、培养细胞、动物和植物胞浆中，尤其在植物组织中活性较高。ME 催化苹果酸氧化脱羧的可逆反应，产生丙酮酸和 CO2 ，以
及伴随 NAD(P)+ 的还原反应，是苹果酸代谢的关键酶。ME 活性与生物合成和抗氧化密切相关。近年来植物 ME 活性测定较多，已经成为抗氧化研
究的热点。根据辅酶专一性和对底物特异性的不同，可将 ME 分为 NAD-ME(EC1.1.1.38)和 NADP-ME(EC1.1.1.40)。
测定原理：
NAD-ME 催化 NAD+还原成 NADH ，在 340nm 下测定 NADH 增加速率。
试剂的组成和配制：
提取液：100mL×1 瓶，4℃保存。；
试剂一：液体 20mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：液体 10mL×1 瓶，4℃保存；
试剂三：粉剂×1 瓶，-20℃保存。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板和蒸馏水。
样本的前处理：
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000 ：1 的比例
（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W ，超声 3s ，间隔 10s ，重复 30 次）；8000g
4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2、检测工作液的配制：用时在试剂三中加入 15mL 试剂一和 1mL 蒸馏水，充分混匀待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
3、测定前将检测工作液在37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 10min 以上：
4、在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 样本、55μL 试剂二和 160μL 工作液，混匀后立即记录 340nm处初始吸光值 A1 和 1min 后的吸光值
A2 ，计算 ΔA=A2-A1。
注 意：如果 ΔA＜0.005 ，可将反应时间延长到2分钟或5分钟。
