多聚半乳糖醛酸酶(PG)检测试剂盒 ; 100T/48S
测定意义：
多聚半乳糖醛酸酶（EC3.2.1.15）是一种细胞壁结合蛋白，可以催化果胶分子中 α-(1,4)-聚半乳糖醛酸的裂解，参与果
胶的降解，使细胞壁结构解体，导致果实软化，与果实成熟、叶和花的脱落、病原物防御，细胞伸展发育以及木质化
有关，在植物抗病性和食品贮藏保鲜领域具有较高的研究价值。
测定原理：
多聚半乳糖醛酸酶水解果胶酸生成半乳糖醛酸，具有还原性醛基，与 DNS 试剂反应生成红棕色物质，在540nm 有特
征吸收峰，测定 540nm 处吸光值变化可计算得多聚半乳糖醛酸酶活性。
需自备的仪器和用品：
天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、恒温水浴锅。
试剂的组成和配制：
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体8mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体15mL×1瓶，4℃避光保存。
酶液提取：
1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1 ：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），
进行冰浴匀浆。16000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、细菌、真菌：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000 ：1 的比例（建议 500 万细胞加入
1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w ，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 16000g， 4℃离
心 10min，取上清置于冰上待测。
3、培养液：直接检测。
测定操作表：
| 对照管 | 测定管 |
样本(μL） | | 30 |
煮沸样本(μL） | 30 | |
试剂一 (μL） | | 120 |
蒸馏水(μL） | 120 | |
40℃水浴 30min |
试剂二(μL） | 150 | 150 |
沸水浴 5min，冰浴或自来水冷却，取 200μL 于微量石英比色皿/96 孔板测定 540nm 处吸光值 A，△A=A 测定管-A 对照管。每个测定管设一个对照管。 |
酶活性计算公式：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y = 3.9642x - 0.008；R²= 0.9996；x 为标准品浓度，mg/mL；y 为吸光值。
1、按照蛋白浓度计算
酶活性定义：
在 40℃, pH6.0 条件下，每毫克蛋白每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位。PG 活性
（mg/h/mg prot）= ( ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T= 2.523×( ΔA+0.008)÷Cpr。
2、按照样本质量计算
酶活性定义：
在 40℃ , pH6.0 条件下，每克样本每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位。 PG 活性
（mg/h/g 鲜重）=( ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反总÷（V 样×W÷V 样总）÷T= 2.523×( ΔA+0.008)÷W。
3、按液体体积计算
酶活性定义：
在 40℃, pH6.0 条件下，每毫升培养液每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位。PG 活性
（mg/h/mL）=( ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反总÷V 样÷T=2.523×( ΔA+0.008)。
4、按细胞数量计算
酶活性定义：
在 40℃, pH6.0 条件下，每 10⁴ 个细胞每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位。
PG 活性（mg/h/10⁴cell）=( ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反总÷（V 样×细胞数量÷V 样总）÷T= 2.523×(
ΔA+0.008)÷细胞数量。V 反总：反应总体积，0.5mL；V 样：反应中样本体积，0.1mL；V 样总：加入提
取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W，样本质量，g；T：反应时间，0.5h。
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y = 1.9821x - 0.008 ，R² = 0.9996；x 为标准品浓度，mg/mL；y 为吸光值。
1、按照蛋白浓度计算
酶活性定义：
在 40℃, pH6.0 条件下，每毫克蛋白每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位。PG 活性
（mg/h/mg prot）=( ΔA+0.008) ÷1.9821×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T= 5.045×( ΔA+0.008)÷Cpr。
2、按照样本质量计算
酶活性定义：
在 40℃, pH6.0 条件下，每克样本每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位（U）。PG 活性
（mg/h/g 鲜重）=( ΔA+0.008) ÷1.9821×V 反总÷（V 样×W÷V 样总）÷T= 5.045×( ΔA+0.008)÷W。
3、按液体体积计算
酶活性定义：
在 40℃, pH6.0 条件下，每毫升培养液每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位（U）。PG 活
性（mg/h/mL）=( ΔA+0.008) ÷1.9821×V 反总÷V 样÷T=5.045×( ΔA+0.008)。
4、按细胞数量计算
酶活性定义：
在 40℃ , pH6.0 条件下，每 10⁴个细胞每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位（U）。
PG 活性（mg/h/10⁴cell）=( ΔA+0.008) ÷1.9821×V 反总÷（V 样×细胞数量÷V 样总）÷T= 5.045×(
ΔA+0.008)÷细胞数量。V 反总：反应总体积，0.15mL；V 样：反应中样本体积，0.03mL；V 样总：加入提
取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W，样本质量，g；T：反应时间，0.5h。
注 意：
煮沸样本建议将样本在沸水中煮沸10分钟，以将酶彻底灭活。
