单宁含量检测试剂盒 ; 50管/48样
测定意义：
H²S 是一种新型气态信号分子，存在于脑内的神经递质，生理浓度的 H²S 对神经系统海马的长时程增强功能具有重要
的调节作用，并对自发性高血压、出血性休克及肝硬化等疾病的过程发挥着重要的病理生理效应。
测定原理：
H²S 与醋酸锌、N, N-二甲基对苯二胺和硫酸铁铵等反应生成亚甲基蓝，亚甲基蓝在 665nm 处有最大吸收峰，通过测
定其吸光值可计算 H²S 含量。
自备实验用品及仪器：
天平、低温离心机、酶标仪、96 孔板、蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 25mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 16mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体 8mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂四：液体 8mL×1 瓶，4℃保存。
试剂五：液体 1.5mL×1 管，4℃避光保存。
样品处理：
1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1 ：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进
行冰浴匀浆，然后 10000g ，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴ 个）：提取液体积（mL）为 500~1000 ：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL
提取液）， 冰浴超声波破碎细胞（功率 300w ，超声 3 秒， 间隔 7 秒，总时间 3min）； 然后10000g ，4℃ , 离心
10min，取上清置于冰上待测。
3. 血清（浆）：直接测定。
操作表：
1 、酶标仪预热 30min ，调节波长至 665nm。
2 、操作表
| 空白管 | 测定管 |
样本(μL） | | 150 |
H²O (μL） | 150 | |
试剂一 (μL） | 150 | 150 |
充分震荡混匀 |
试剂二(μL） | 150 | 150 |
10000g ，4℃, 离心 10min，去上清，留沉淀 |
H²O (μL） | 150 | 150 |
10000g ，4℃, 离心 10min，去上清，留沉淀 |
试剂一 (μL） | 75 | 75 |
试剂三(μL） | 75 | 75 |
充分震荡混匀 |
试剂四(μL） | 75 | 75 |
10000rpm ，4℃ , 离心 10min ，吸取 200μL 上清于 96 孔板中 |
试剂五(μL） | 10 | 10 |
混匀，25℃静置 5min ，测定 665nm 吸光值，记为 A 测定和 A 空白，ΔA=A 测定-A 空白。 |
H²S 计算公式：
用96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线回归方程为：y = 0.0022x ，R² = 0.9988
（1）组织样品
a. 按照蛋白浓度计算
ΔA
H²S（nmol/mg prot） V 反总÷(V 样×Cpr)=681.8×ΔA÷Cpr
0.0022
b. 按照样本重量计算
ΔA
H²S(nmol/g 鲜重） V 反总÷(V 样÷V 样总×W)= 681.8×ΔA÷W
0.0022
( 2 ) 细胞
ΔA
H²S（nmol/10⁴cell）= ×V 反总÷（V 样÷V 样总×细胞数量(万个)）=681.8×ΔA÷细胞数量（万个）
0.0022
（3）液体样品
ΔA
H²S（nmol/mL） V 反总÷V 样= 681.8× ΔA
0.0022
V 反总：反应总体积，0.225mL；V 样：反应中样品体积，0.15mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；W：样品质量，g；Cpr：蛋白浓度，mg/mL
注意事项：
最低检出限为 1nmol/mL。
