测定意义：
果胶酶（pectinase）是一类分解果胶质酶类的总称，包括原果胶酶，果胶酯酶，多聚半乳糖醛酸酶和果胶裂解酶四大类，广泛存在于植物果实和微生物中，主要用于食品、酿酒、环保、医药、纺织及日化用品行业。
测定原理：
果胶酶水解果胶生成半乳糖醛酸，具有还原性醛基，与 DNS 试剂反应生成红棕色物质，在 540nm 有特征吸收峰，测定 540nm处吸光值变化可计算得果胶酶活性。
需自备的仪器和用品：
天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、恒温水浴锅。
试剂的组成和配制：
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体20mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×2瓶，4℃保存；临用前加入 7.5mL 试剂一，50℃加热溶解，用不完的试剂 4℃保存一周。
试剂三：液体20mL×1瓶，4℃避光保存。
酶液提取：
1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。 10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、细菌、真菌：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000 ：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w ，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 10000g ，4℃离心 10min，取上清置于冰上待测。
3、细胞培养液等：直接检测。
测定操作表：
| 对照管 | 测定管 |
试剂二(µL） | 120 | 120 |
50℃水浴温育 5min |
样本(µL） | | 30 |
煮沸样本(µL） | 30 | |
混匀，50℃水浴反应 30min |
试剂三(µL） | 150 | 150 |
沸水浴 5min ，冰浴冷却终止反应，8000g ，4℃ , 离心 10min ，蒸馏水调零，取上清于微量石英比色皿或 96 孔板测定 540nm 处吸光值 A，△A=A 测定管-A 对照管。每个测定管需设一个对照管。 |
酶活性计算公式：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y = 3.9642x - 0.008；R2 = 0.9996；x 为标准品浓度，mg/mL；y 为吸光值。
1、按照蛋白浓度计算
酶活性定义：
在 50℃ , pH3.5 条件下，每毫克蛋白每小时分解果胶产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶
活力单位。果胶酶活性（mg/h/mg prot）= ( ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T= 2.523×( ΔA+0.008)÷Cpr。
2、按照样本质量计算
酶活性定义：
在 50℃ , pH3.5 条件下，每克样本每小时分解果胶产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位。果胶酶活性（mg/h /g 鲜重）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反总÷（V 样×W÷V 样总）÷T= 2.523×( ΔA+0.008)÷W。
3、按细胞数量计算
酶活性定义：
在 50℃ , pH3.5 条件下，每 104 细胞每小时分解果胶产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位。
果胶酶活性（mg/h /10⁴cell）=( ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反总÷（V 样×细胞数量÷V 样总）÷T= 2.523×( ΔA+0.008)÷细胞数量。
4、细胞培养液
酶活性定义：
在 50℃ , pH3.5 条件下，每毫升培养液每小时分解果胶产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位。
果胶酶活性（mg/h /mL）=( ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反总÷V 样÷T=2.523×( Δ
A+0.008)。
V 反总：反应总体积，0.15mL；V 样：反应中样本体积，0.03mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度， mg/mL；W，样本质量，g；T：反应时间，0.5h。
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y = 1.9821x - 0.008 ，R²= 0.9996；x 为标准品浓度，mg/mL；y 为吸光值。
1、按照蛋白浓度计算
酶活性定义：
在 50℃ , pH3.5 条件下，每毫克蛋白每小时分解果胶产。生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位。果胶酶活性 （mg/h/mg prot）=( ΔA+0.008) ÷1.9821×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T= 5.045×( ΔA+0.008)÷Cpr。
2、按照样本质量计算
酶活性定义：
在 50℃ , pH3.5 条件下，每克样本每小时分解果胶产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位。果胶酶活性 （mg/h/g 鲜重）=( ΔA+0.008) ÷1.9821×V 反总÷（V 样×W÷V 样总）÷T= 5.045×( ΔA+0.008)÷W。
3、按细胞数量计算
酶活性定义：
在 50℃ , pH3.5 条件下，每 10⁴ 细胞每小时分解果胶产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位。果胶酶活性 （mg/h /10⁴cell）=( ΔA+0.008) ÷1.9821×V 反总÷（V 样×细胞数量÷V 样总）÷T= 5.045×( ΔA+0.008)÷细胞数量。
4、细胞培养液
酶活性定义：
在 50℃ , pH3.5 条件下，每毫升培养液每小时分解果胶产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位。
果胶酶活性（mg/h/mL）=( ΔA+0.008) ÷1.9821×V 反总÷V 样÷T=5.045×( ΔA+0.008)。
V 反总：反应总体积，0.15mL；V 样：反应中样本体积，0.03mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本 蛋白浓度，mg/mL；W，样本质量，g；T：反应时间，0.5h。
注 意：
1、试剂二若有沉淀析出，请置于 50℃加热溶解。
2、测定之前请先做预实验，如果吸光值较高或较低，请用提取液做适当的稀释或者加大样本量，并在计算公式中乘以稀释倍数或者以实际加入的样本体积参与计算。
3、煮沸样本建议在沸水中煮沸 10 分钟，以将酶彻底灭活。
