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过氧化物酶(POD)检测试剂盒 ; 100管/96样

过氧化物酶(POD)检测试剂盒 ; 100管/96样

  • 货号:YJ49012
  • 可售卖地:全国
  • 供货:现货供应
  • 保 质 期:半年
  • 品牌:源桔生物
  • 保存温度:2-8℃
  • 检测方法:微量法
  • 分类:氧化与抗氧化系列
  • 规格:100管/96样
  • 用途:仅供科研使用
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源桔生物 YJ49012 100管/96样 ¥667 大量 液体盒装
  • 商品详情
测定意义: 
POD(EC 1.11.1.7 )广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物,具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。
测定原理: 
POD催化HCO2氧化特定底物,在470nm有特征光吸收。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成:
提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存;
试剂一:液体25mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:液体100μL×1支,4℃保存;
试剂三:液体100μL×1支,4℃保存。
粗酶液提取:
1、细菌、细胞或组织样品的制备:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(10⁴个):提取液体积(mL)为500~1000 :1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W ,超声3s ,间隔10s重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1 :5~10 的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样品:直接检测。
测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至470nm,蒸馏水调零。
2、工作液的配制:临用前将试剂一、试剂二、试剂三按照2.6(mL):1.5 (μL):1 (μL)的比例混匀;在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热10min以上;现配现用。
3、在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本和190μL工作液,混匀,记录470nm下1min时吸光值A1和2min后的吸光值A2。计算ΔA=A2-A1。
POD 活性计算:
用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、血清(浆)POD活性
单位定义:每mL血清(浆)在每mL反应体系中每分钟A470变化0.01为一个酶活力单位。
计算公式:
POD(U/mL)=ΔA×V反总÷V样÷0.01÷T=2000×ΔA
2、组织、细菌或细胞POD活性
(1) 按样本蛋白浓度计算
     单位定义:每mg组织蛋白在每mL反应体系中每分钟A470变化0.01为一个酶活力单位。 POD(U/mg prot)=ΔA×V反总÷
     (V样×Cpr)÷0.01÷T =2000×ΔA÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算
     单位定义:每g组织在每mL反应体系中每分钟A470变化0.01为一个酶活力单位。POD(U/g鲜重)=ΔA×V反总÷(W×
     V样÷V样总)÷0.01÷T =2000×ΔA÷W
(3) 按细菌或细胞密度计算
      单位定义:每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中每分钟A470变化0.01为一个酶活力单位。POD(U/10⁴cell)=ΔA×V
      反总÷(500×V样÷V样总)÷0.01÷T =4×ΔAV反总:反应体系总体积,0.2mL;V样:加入样本体积,0.01mL;V样总:加入
      提取液体积,1mL;T:反应时间,1min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量;500:细菌或细胞总数,500万。
用96孔板测定的计算公式如下
1、血清(浆)POD活性
     单位定义:每mL血清(浆)在每mL反应体系中每分钟A470变化0.005为一个酶活力单位。POD(U/mL)=ΔA×V反总÷V
     样÷0.005÷T =4000×ΔA
2、组织、细菌或细胞POD活性
(1)  按样本蛋白浓度计算
      单位定义:每mg组织蛋白在每mL反应体系中每分钟A470变化0.005为一个酶活力单位。 POD(U/mg prot)=ΔA×V
      反总÷(V样×Cpr)÷0.005÷T =4000×ΔA÷Cpr
(3) 按样本鲜重计算
     单位定义:每g组织在每mL反应体系中每分钟A470变化0.005为一个酶活力单位。 POD(U/g鲜重)=ΔA×V反总÷(W×
     V样÷V样总)÷0.005÷T=4000×ΔA÷W
(4) 按细菌或细胞密度计算
     单位定义:每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中每分钟A470变化0.005为一个酶活力单位。 POD(U/10⁴cell)=ΔA×V反
     总÷(500×V样÷V样总)÷0.005÷T =8×ΔAV反总:反应体系总体积,0.2mL; V样:加入样本体积,0.01mL;V样总:加入
     提取液体积,1 mL;T:反应时间,1min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量;500:细菌或细胞总数,500万。
注 意:
如果ΔA小于0.005 ,可将反应时间延长到5min 。如果ΔA大于0.5,可将样本用提取液稀释后测定,计算公式中乘以相应稀释倍数。