测定意义：
POD(EC 1.11.1.7 )广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类
、胺类毒性的双重作用。
测定原理：
POD催化HCO2氧化特定底物，在470nm有特征光吸收。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成：
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体25mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：液体100μL×1支，4℃保存；
试剂三：液体100μL×1支，4℃保存。
粗酶液提取：
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量(10⁴个)：提取液体积(mL)为500~1000 ：1的例(建议500万细菌或细胞加入1mL 提取液)，超声波破碎细菌或细胞(冰浴，功率20％或200W ，超声3s ，间隔10s ，重复 30 次)
；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1 ：5~10 的比例(建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液)，进行冰浴匀浆。8000g 4℃
离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、血清(浆)样品：直接检测。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至470nm，蒸馏水调零。
2、工作液的配制：临用前将试剂一、试剂二、试剂三按照2.6(mL)：1.5 (μL)：1 (μL)的比例混匀；在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热10min以上；现配现用。
3、在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本和190μL工作液，混匀，记录470nm下1min时吸光值A1和2min后的吸光值A2。计算ΔA＝A2-A1。
POD 活性计算：
用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、血清(浆)POD活性
单位定义：每mL血清(浆)在每mL反应体系中每分钟A470变化0.01为一个酶活力单位。
计算公式：
POD(U/mL)=ΔA×V反总÷V样÷0.01÷T=2000×ΔA
2、组织、细菌或细胞POD活性
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位定义：每mg组织蛋白在每mL反应体系中每分钟A470变化0.01为一个酶活力单位。 POD(U/mg prot)=ΔA×V反总÷(V
样×Cpr)÷0.01÷T =2000×ΔA÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算
单位定义：每g组织在每mL反应体系中每分钟A470变化0.01为一个酶活力单位。POD
(U/g鲜重)=ΔA×V反总÷(W×V样÷V样总)÷0.01÷T =2000×ΔA÷W
(3) 按细菌或细胞密度计算
单位定义：每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中每分钟A470变化0.01为一个酶活力单位。POD(U/10⁴cell)=ΔA×V反总÷(500×
V样÷V样总)÷0.01÷T =4×ΔAV反总：反应体系总体积，0.2mL；V样：加入样本体积，0.01mL；V样总：加入提取液体积，1mL
；T：反应时间，1min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量；500：细菌或细胞总数，500万。
用96孔板测定的计算公式如下
1、血清(浆)POD活性
单位定义：每mL血清(浆)在每mL反应体系中每分钟A470变化0.005为一个酶活力单位。POD(U/mL)=ΔA×V反总÷V样÷0.005÷
T =4000×ΔA
2、组织、细菌或细胞POD活性
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位定义：每mg组织蛋白在每mL反应体系中每分钟A470变化0.005为一个酶活力单位。 POD(U/mg prot)=ΔA×V反总÷(V
样×Cpr)÷0.005÷T =4000×ΔA÷Cpr
(3) 按样本鲜重计算
单位定义：每g组织在每mL反应体系中每分钟A470变化0.005为一个酶活力单位。 POD(U/g鲜重)=ΔA×V反总÷(W× V样÷V
样总)÷0.005÷T=4000×ΔA÷W
(4) 按细菌或细胞密度计算
单位定义：每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中每分钟A470变化0.005为一个酶活力单位。 POD(U/10⁴cell)=ΔA×V
反总÷(500×V样÷V样总)÷0.005÷T =8×ΔAV反总：反应体系总体积，0.2mL； V样：加入样本体积，0.01mL；V样总：加入
提取液体积，1 mL；T：反应时间，1min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量；500：细菌或细胞总数，500万。
注 意：
如果ΔA小于0.005 ，可将反应时间延长到5min 。如果ΔA大于0.5，可将样本用提取液稀释后测定，计算公式中乘以相应稀释倍数。
