ATP柠檬酸裂解酶(ACL)检测试剂盒 ; 100管/96样
测定意义：
ACL（EC4.1.3.8）是脂肪酸合成中的关键酶，其催化产生的乙酰辅酶 A 可用于脂肪酸合成和碳链延长、黄酮类物质合成、氨基酸合成等。
测定原理：
ACL 在 ATP 和辅酶 A 存在的情况下催化柠檬酸裂解为乙酰辅酶 A、草酰乙酸、腺苷二磷酸和磷酸盐。苹果酸脱氢酶进一步催化草酰乙酸和 NADH 生成苹果酸和 NAD+，在 340nm 测定 NADH 减少速率，计算 ACL活性。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体 20mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存；
试剂三：液体2μL×1支，4℃保存；
样本的前处理：
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量(10⁴个)：提取液体积(mL)为 500~1000 :1
的比例(建议 500 万细菌或细胞加入1mL提取液)，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W ，超声 3s ，间隔10s，重复30
次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液)，进行冰浴匀浆。8000g
4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2、样本测定
(1) 工作液的配置，将试剂二和试剂三转移至试剂一中，充分混合溶解，置于 37℃(哺乳动物)或 25℃ (其它物种)水浴 5min；(注意：可
取少量试剂一至试剂二和试剂三中，充分混匀溶解后转移至试剂一瓶中，重复2-3 遍)；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复融。
(2) 在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 样本和 190μL 工作液，混匀，立即记录 340nm 处 20s 时的吸光值 A1 和 2min20s 后的
吸光值 A2 ，计算 ΔA=A1-A2。
ACL活性计算：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、血清（浆）ACL 活力计算：
单位定义：每毫升血清（浆）每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
ACL（nmol/min/mL）＝[ΔA×V 反总÷ (ε×d）×10⁹]÷V 样÷T=1608×ΔA。
2、组织、细菌或细胞中ACL活力计算：
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位定义：每mg组织蛋白每分钟消耗 1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
ACL（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反总÷ (ε×d）×10⁹]÷(V 样×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算
单位定义：每 g 组织每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
ACL（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V反总÷ (ε×d）×10⁹]÷(W ×V 样÷V样总)÷T=1608×ΔA÷W
(3) 按细菌或细胞密度计算
单位定义：每1万个细胞每分钟消耗 1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
ACL（nmol/min/10⁴cell）＝[ΔA×V 反总÷(ε×d）×10⁹]÷(500×V 样÷V样总)÷T=3.216×ΔA
V 反总：反应体系总体积，2×10-⁴L；ε ：NADH 摩尔消光系数，6.22×10³L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；
V 样：加入样本体积，0.01 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，2 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；
W：样本质量，g； 500：细菌或细胞总数，500 万。
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
1、血清（浆）ACL 活力计算：
单位定义：每毫升血清（浆）每分钟消耗1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
ACL（nmol/min/mL）＝[ΔA×V 反总÷ (ε×d）×10⁹]÷V 样÷T=3216×ΔA
2、组织、细菌或细胞中ACL 活力计算：
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位定义：每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
ACL（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反总÷ (ε×d）×10⁹]÷(V 样×Cpr) ÷T=3216×ΔA÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算
单位定义：每g组织每分钟消耗1nmol NADH定义为一个酶活力单位。
ACL（nmol/min/g鲜重）＝[ΔA×V 反总÷ (ε×d）×10⁹]÷(W× V 样÷V 样总)÷T=3216×ΔA÷W
(3) 按细菌或细胞密度计算：
单位定义：每1万个细胞每分钟消耗1nmol NADH定义为一个酶活力单位。
ACL（nmol/min/10⁴cell）＝[ΔA×V 反总÷ (ε×d）×10⁹]÷(500×V 样÷V样总)÷T=6.432×ΔA
V 反总：反应体系总体积，2×10-⁴L；ε ：NADH 摩尔消光系数，6.22×10³L / mol /cm；d：96 孔板光径， 0.5cm；
V 样：加入样本体积，0.01 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，2 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；
W：样本 质 量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
