脂蛋白酯酶(LPL)检测试剂盒 ; 50管/24样

脂蛋白酯酶(LPL)检测试剂盒 ; 50管/24样

测定意义： 

脂蛋白酯酶是脂肪细胞、心肌细胞、骨骼肌细胞、乳腺细胞及巨噬细胞等实质细胞合成的一种酶，可催化甘油三脂水解为脂肪酸和单酸甘油酯，以供组织氧化供能和贮存，并在不同的组织表现出不同的生理意义。

测定原理： 

脂蛋白酯酶水解 4-硝基苯棕榈酸酯产生 4-硝基苯酚，在 400nm 有特征吸收峰。

需自备的仪器和用品：

天平、冷冻离心机、研钵、水浴锅、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿。

试剂组成和配制：

试剂一：液体 60 mL×1瓶，4℃保存；

试剂二：液体 10 mL ×1瓶，4℃避光保存；

试剂三：液体 25mL×1瓶，4℃保存。

样品处理：

1、组织：按照质量(g)：试剂一体积(mL)为 1 :5~10 的比例(建议称取约 0.1g ，加入 1mL 试剂一)加入试剂一，冰浴匀浆后于 4℃,

10000g 离心 10min，取上清待测。

2、细胞：按照细胞数量（10⁴个）：试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议500万细胞加入 1mL 试剂一)加入试剂一，冰浴超声

波破碎细胞（功率 300w ，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后于4℃, 10000g 离心 10min，取上清待测。

3、血清：直接测定。

测定操作：

计算公式：

标准曲线：y= 0.0581x -0.0169 ，R2=0.9982

1 、按照蛋白浓度计算：

      酶活性定义：在 45℃, pH7.5 条件下，每毫克蛋白每分钟水解产生 1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。

     LPL 活性(μmol /min/mg prot）= (△A+0.0169)÷ 0.0581×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T= 17.21×  (△A+0.0169）÷Cpr。

2、按照样本质量计算：

     酶活性定义：在 45℃, pH7.5 条件下，每克组织每分钟水解产生 1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。

     LPL 活性(μmol /min /g 鲜重）=  (△A+0.0169）÷0.0581×V 反总÷（W×V 样÷V 样总）÷T= 17.21×  (△A+0.0169）÷W

3、按照细胞数量计算：

     酶活性定义：在 45℃, pH7.5 条件下，每104个细胞每分钟水解产生1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。

     LPL活性(μmol /min /10⁴cell)= (△A+0.0169）÷0.0581×V 反总÷(V 样×细胞数量÷V 样总)÷T= 17.21×(△A+0.0169)÷

     细胞数量。

4、按照液体体积计算：

     酶活性定义：在 45℃, pH7.5 条件下，每毫升血清每分钟水解产生 1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。

     LPL 活性(μmol /min /mL）=  (△A+0.0169）÷0.0581×V 反总÷V 样÷T= 17.21×  (△A+0.0169）

     V 反总：反应总体积，1mL ；V 样：反应体系中加入样本体积，0.1mL ；W：样本质量，g ；V 样总：加入提取液体积，

    1mL；T：反应时间，10min

注意事项：

1、试剂三加入混匀后静置两分钟立即测定，否则影响吸光值。

2、吸光值过高或者测定结果不稳定，则将酶液进行适当的稀释，并在计算公式中乘以稀释倍数。