欢迎您来到源桔生物!

电话:021-54479081

本公司产品仅供科研使用,不用于人体及临床诊断!
销售一部:15216759556,销售二部:15921990938,销售三部:19946122371,销售四部:13524933321,销售五部:13641951130,销售六部:17740839645
产品分类:
更多
果胶裂解酶检测试剂盒 ; 100T/48S

果胶裂解酶检测试剂盒 ; 100T/48S

  • 货号:YJ49311
  • 可售卖地:全国
  • 供货:现货供应
  • 保 质 期:半年
  • 品牌:源桔生物
  • 保存温度:2-8℃
  • 检测方法:微量法
  • 分类:果胶系列
  • 规格:100T/48S
  • 用途:仅供科研使用
  • 咨 询 客 服
品牌 货号 纯度/规格 价格 库存 包装
源桔生物 YJ49311 100T/48S ¥1150 大量 液体盒装
  • 商品详情
测定意义: 
果胶裂解酶(EC4.2.2.10)是果胶酶的重要组成部分,是一种能降解植物细胞壁,导致植物组织软化甚至死亡的解聚酶,来源比较广泛,主要来源于微生物,可用于果汁、果酒的澄清,提高水果出汁率,植物病毒的纯化,纸浆的漂白和纺织品的生物精炼,在减少环境污染和降低能源消耗方面具有潜在的应用价值。
测定原理: 
果胶裂解酶作用于果胶中的 α-1,4 糖苷键,生成在还原端 C4 和 C5 之间位置具有不饱和键的不饱和寡聚半乳糖醛酸,在 235nm 处有特征吸收峰。
需自备的仪器和用品:
天平、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板(UV 板)、恒温水浴锅。
试剂的组成和配制:
提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体6mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体6mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:液体6mL×1瓶,4℃保存。
酶液提取:
1、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1 :5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。10000g  ,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、细菌、真菌:按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000 :1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w ,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后 10000g, 4℃ , 离心 10min,取上清置于冰上待测。
3、培养液:直接检测。
测定操作表:
1 、 分光光度计/酶标仪预热30min ,调节波长至 235nm,蒸馏水调零。
2 、 操作表

对照管

测定管

试剂一 (μL)

 

120

试剂二(μL)

120

 

40℃温育 3min

酶液(μL)

20

20

混匀,40℃反应 30min

试剂三(μL)

60

60

混匀于微量石英比色皿/96 孔板(UV 板)测定 235nm 处吸光值 A ,△A=A 测定管-A 对照管。

酶活性计算公式:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1. 组织中 PL 活性
(1) 按照蛋白浓度计算
酶活性定义:
在 40℃, pH5.5 条件下,每毫克蛋白每分钟分解果胶产生 1nmol 不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。
PL 活性(nmol/min/mg prot)=△A÷  (ε×d)×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T= 64.1×△A÷Cpr。
(2) 按照样本质量计算
酶活性定义:
在 40℃, pH5.5 条件下,每克组织每分钟分解果胶产生 1nmol 不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。
PL 活性(nmol/min/g  鲜重)=  △A÷  (ε×d)×V 反总÷(V 样×W÷V 样总)÷T= 64.1×△A÷W。
2、细菌、真菌 PL 活性
酶活性定义:
在 40℃, pH5.5 条件下,每 104 个细胞每分钟分解果胶产生 1nmol 不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。PL 活性(nmol/min/104cell)= △A ÷ (ε×d)×V 反总÷(V 样×细胞数量÷V 样总)÷T= 64.1×△A÷细胞数量。
3、培养液 PL 活性
酶活性定义:
在 40℃, pH5.5 条件下,每毫升培养液每分钟分解果胶产生 1nmol 不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。
PL 活性(nmol/min/mL)=  △A÷  (ε×d)×V 反总÷V 样÷T= 64.1×△A。ε :不饱和半乳糖醛酸摩尔消光系数:5200L/mol/cm ;d:比色皿光径,1cm;V 反总:反应总体积,0.2mL; V 样:反应体系中样本体积,0.02mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W,样本质量,g;T:反应时间,30min。
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
1、组织中 PL 活性
(1) 按照蛋白浓度计算
酶活性定义:
在 40℃, pH5.5 条件下,每毫克蛋白每分钟分解果胶产生 1nmol 不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。
PL 活性(nmol/min/mg prot)= △A÷  (ε×d)×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T= 128.2×△A÷Cpr。
(2) 按照样本质量计算
酶活性定义:
在 40℃, pH5.5 条件下,每克组织每分钟分解果胶产生 1nmol 不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。
PL 活性(nmol/min/g  鲜重)= △A÷  (ε×d)×V 反总÷(V 样×W÷V 样总)÷T= 128.2×△A÷W。
2、细菌、真菌 PL 活性
酶活性定义:
在 40℃, pH5.5 条件下,每 104 个细胞每分钟分解果胶产生 1nmol 不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。PL 活性(nmol/min/104cell)=△A÷  (ε×d)×V 反总÷(V 样×细胞数量÷V 样总)÷T=128.2×△A÷细胞数量。
3、培养液 PL 活性
酶活性定义:
在 40℃, pH5.5 条件下,每毫升培养液每分钟分解果胶产生 1nmol 不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。
PL 活性(nmol/min//mL)=  △A÷  (ε×d)×V 反总÷V 样÷T= 128.2×△A。ε:不饱和半乳糖醛酸摩尔消光系数:5200L/mol/cm ;d:比色皿光径,0.5cm ;V 反总:反应总体积, 0.2mL;V 样:反应体系中样本体积,0.02mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度, mg/mL;W,样本质量,g;T:反应时间,30min。