a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1. 组织中 PL 活性
(1) 按照蛋白浓度计算
酶活性定义:
在 40℃, pH5.5 条件下,每毫克蛋白每分钟分解果胶产生 1nmol 不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。
PL 活性(nmol/min/mg prot)=△A÷ (ε×d)×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T= 64.1×△A÷Cpr。
(2) 按照样本质量计算
酶活性定义:
在 40℃, pH5.5 条件下,每克组织每分钟分解果胶产生 1nmol 不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。
PL 活性(nmol/min/g 鲜重)= △A÷ (ε×d)×V 反总÷(V 样×W÷V 样总)÷T= 64.1×△A÷W。
2、细菌、真菌 PL 活性
酶活性定义:
在 40℃, pH5.5 条件下,每 104 个细胞每分钟分解果胶产生 1nmol 不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。PL 活性(nmol/min/104cell)= △A ÷ (ε×d)×V 反总÷(V 样×细胞数量÷V 样总)÷T= 64.1×△A÷细胞数量。
3、培养液 PL 活性
酶活性定义:
在 40℃, pH5.5 条件下,每毫升培养液每分钟分解果胶产生 1nmol 不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。
PL 活性(nmol/min/mL)= △A÷ (ε×d)×V 反总÷V 样÷T= 64.1×△A。ε :不饱和半乳糖醛酸摩尔消光系数:5200L/mol/cm ;d:比色皿光径,1cm;V 反总:反应总体积,0.2mL; V 样:反应体系中样本体积,0.02mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W,样本质量,g;T:反应时间,30min。
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
1、组织中 PL 活性
(1) 按照蛋白浓度计算
酶活性定义:
在 40℃, pH5.5 条件下,每毫克蛋白每分钟分解果胶产生 1nmol 不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。
PL 活性(nmol/min/mg prot)= △A÷ (ε×d)×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T= 128.2×△A÷Cpr。
(2) 按照样本质量计算
酶活性定义:
在 40℃, pH5.5 条件下,每克组织每分钟分解果胶产生 1nmol 不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。
PL 活性(nmol/min/g 鲜重)= △A÷ (ε×d)×V 反总÷(V 样×W÷V 样总)÷T= 128.2×△A÷W。
2、细菌、真菌 PL 活性
酶活性定义:
在 40℃, pH5.5 条件下,每 104 个细胞每分钟分解果胶产生 1nmol 不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。PL 活性(nmol/min/104cell)=△A÷ (ε×d)×V 反总÷(V 样×细胞数量÷V 样总)÷T=128.2×△A÷细胞数量。
3、培养液 PL 活性
酶活性定义:
在 40℃, pH5.5 条件下,每毫升培养液每分钟分解果胶产生 1nmol 不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。
PL 活性(nmol/min//mL)= △A÷ (ε×d)×V 反总÷V 样÷T= 128.2×△A。ε:不饱和半乳糖醛酸摩尔消光系数:5200L/mol/cm ;d:比色皿光径,0.5cm ;V 反总:反应总体积, 0.2mL;V 样:反应体系中样本体积,0.02mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度, mg/mL;W,样本质量,g;T:反应时间,30min。