脂蛋白酯酶(LPL)检测试剂盒 ; 100T/48S
测定意义：
脂蛋白酯酶是脂肪细胞、心肌细胞、骨骼肌细胞、乳腺细胞及巨噬细胞等实质细胞合成的一种酶，可催化甘油三脂水解为脂肪酸和单酸甘油酯，以供组织氧化供能和贮存，并在不同的组织表现出不同的生理意义。
测定原理：
脂蛋白酯酶水解 4-硝基苯棕榈酸酯产生 4-硝基苯酚，在 400nm 有特征吸收峰。
需自备的仪器和用品：
天平、冷冻离心机、研钵、水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板。
试剂组成和配制：
试剂一：液体 105 mL× 1 瓶，4℃保存；
试剂二：液体 4 mL × 1 瓶，4℃避光保存；
试剂三：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。
样品处理：
1、组织：按照质量(g)：试剂一体积(mL)为 1 :5~10 的比例（建议称取约 0.1g ，加入1mL试剂一）加入试剂一，冰浴匀浆后于 4℃,
10000g 离心 10min，取上清待测。
2、细胞：按照细胞数量（10⁴个）：试剂一体积（mL）为 500~1000 ：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一）加入试剂一，
冰浴超声波破碎细胞（功率 300w ，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后于4℃, 10000g 离心 10min，取上清待测。
3、血清：直接测定。
测定操作：
| 对照管 | 测定管 |
样品(μL） | 20 | 20 |
试剂一 (μL） | 80 | |
试剂二(μL） | | 80 |
混匀，45℃水浴 10min |
试剂三(μL | 100 | 100 |
充分混匀，25℃静置2min ，于微量石英比色皿/96 孔板，测定 400nm 处吸光值，记为 A 对照管和 A 测定管，△A=A 测定管- A 对照管 |
计算公式：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y= 0.0581x -0.0169 ，R2=0.9982
1、按照蛋白浓度计算：
酶活性定义：在 45℃, pH7.5 条件下，每毫克蛋白每分钟水解产生 1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。
LPL 活性(μmol /min/mg prot）= (△A+0.0169）÷ 0.0581×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T= 17.21× (△A+0.0169)÷Cpr。
2、按照样本质量计算：
酶活性定义：在 45℃, pH7.5 条件下，每克组织每分钟水解产生 1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。
LPL 活性(μmol /min /g 鲜重）= (△A+0.0169)÷0.0581×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T= 17.21× (△A+0.0169)÷W
3、按照细胞数量计算：
酶活性定义：在 45℃, pH7.5 条件下，每10⁴个细胞每分钟水解产生1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。
LPL活性(μmol /min /10⁴cell）= (△A+0.0169)÷0.0581×V 反总÷(V 样×细胞数量÷V 样总)÷T= 17.21×(△A+0.0169)÷细胞数量
4、按照液体体积计算：
酶活性定义：在 45℃, pH7.5 条件下，每毫升血清每分钟水解产生 1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。
LPL 活性(μmol /min /mL）= (△A+0.0169）÷0.0581×V 反总÷V 样÷T= 17.21× (△A+0.0169）
V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：反应体系中加入样本体积，0.02mL；W：样本质量，g；V 样总：加入提取液体积，
1mL；T：反应时间，10min
b．用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y= 0.029x -0.0169 ，R2=0.9982
1、按照蛋白浓度计算：
酶活性定义：在 45℃, pH7.5 条件下，每毫克蛋白每分钟水解产生 1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。
LPL 活性(μmol /min/mg prot）= (△A+0.0169）÷ 0.029×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T= 34.42× (△A+0.0169）÷Cpr
2、按照样本质量计算：
酶活性定义：在 45℃, pH7.5 条件下，每克组织每分钟水解产生 1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。
LPL 活性(μmol /min/g 鲜重)= (△A+0.0169)÷0.029×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T= 34.42×(△A+0.0169)÷W
3、按照细胞数量计算：
酶活性定义：在 45℃, pH7.5 条件下，每 10⁴个细胞每分钟水解产生 1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。
LPL 活性(μmol /min/10⁴cell)= (△A+0.0169)÷0.029×V 反总÷(V 样×细胞数量÷V 样总)÷T=34.42×(△A+0.0169)÷细胞数量
4、按照液体体积计算：
酶活性定义：在 45℃, pH7.5 条件下，每毫升血清每分钟水解产生 1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。
LPL 活性(μmol /min/mL）= (△A+0.0169）÷0.029×V 反总÷V 样÷T= 34.42× (△A+0.0169）
V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：反应体系中加入样本体积，0.02mL；W：样本质量，g；V 样总：加入提取液体积，
1mL； T：反应时间，10min
注意事项：
1、试剂三加入混匀后静置两分钟立即测定，否则影响吸光值。
2、吸光值过高或者测定结果不稳定，则将酶液进行适当的稀释，并在计算公式中乘以稀释倍数。
