磷脂酶A2(PLA2)检测试剂盒 ; 50管/24样
测定意义：
磷脂酶 A2（EC3.1.1.4）是磷脂 sn-2 位脂酰基水解酶，广泛存在于动植物组织、细菌、细胞核分泌物中，参与脂肪消化，精子成熟、细胞信号传递、脂质过氧化修复、宿主反应等生理过程，在控制体内磷脂类物质平衡、调节机体新陈代谢、参与疾病的病理进程等方面发挥着及其重要的作用。
测定原理：
磷脂酶 A2 作用于 2-硫代十六酰乙基磷酸胆碱（HEPC）产生游离巯基，与 DTNB 反应生成黄色物质，在 412nm处有特征吸收峰。
需自备的仪器和用品：
天平、超速冷冻离心机、研钵、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿。
试剂组成和配制：
提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 50mL× 1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 50mL × 1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体×5 瓶，-20℃避光保存。临用前根据用量每瓶加入 4.5mL 试剂二充分混匀；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
样品处理：
1、组织：按照质量(g)：提取液体积(mL)为 1：5~10的比例（建议称取约 0.1g ，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于 4℃,
10000g 离心 5min ，取全部上清于 4℃、100000g 离心 30min ，弃上清，取沉淀溶于 1mL 试剂一。
2、细胞：按照细胞数量(10⁴个)：提取液体积（mL）为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL提取液)，冰浴超声波破碎细胞
(功率 300w，超声3秒，间隔7秒，总时间 3min)；然后于4℃ , 10000g离心5min ，取全部上清于 4℃、100000g 离心 30min，弃上
清，取沉淀溶于 1mL 试剂一。
3、血清：直接测定。
测定操作：
| 对照管 | 测定管 |
样品(μL） | 100 | 100 |
试剂二 (μL） | 900 | |
试剂三(μL） | | 900 |
充分混匀，37℃反应 10min ，于 1mL 玻璃比色皿，蒸馏水调零，测定 412nm 处吸光值，记为 A 对照管和 A 测定管，△A=A 测定管- A 对照管 |
计算公式：
用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、按照蛋白浓度计算：
酶活性定义：每毫克蛋白每分钟水解HEPC产生1nmol 游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。
PLA2 活性(nmol/min/mg prot)=△A÷( ε ×d）×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T= 73.53×△A÷Cpr。
2、按照样本质量计算：
酶活性定义：每克组织每分钟水解 HEPC 产生 1nmol 游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。
PLA2 活性（nmol/min/g 鲜重）= △A÷ ( ε ×d）×V 反总÷（W×V 样÷V 样总）÷T= 73.53×△A÷W
3、细胞数量计算：
酶活性定义：每 10⁴个细胞每分钟水解 HEPC 产生 1nmol 游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。
PLA2 活性（nmol/min/10⁴ cell）= △A÷ ( ε ×d）×V 反总÷（V 样×细胞数量÷V 样总）÷T= 73.53×△A÷细胞数量
4、按照液体体积计算：
每毫升血清每分钟水解 HEPC 产生 1nmol 游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。
PLA2 活性（nmol/min/mL= △A÷( ε ×d）×V 反总÷V 样÷T= 73.53×△A
ε ：TNB 消光系数，13600L/mol/cm ；d：比色皿光径，1cm ；V 反总：反应总体积，1mL；V 样：反应体系中加入样本
体积， 0.1mL；W：样本质量，g；V 样总：加入提取液体积，1mL；
T：反应时间，10min
