磷脂酶C(PLC)检测试剂盒 ; 50管/48样
测定意义：
磷脂酶 C（EC 3.1.4.3）是一种水解甘油磷酸酯 C3 位点甘油磷酸酯键的脂类水解酶，广泛存在于微生物及动植物的组织和细胞中，在细胞代谢、细胞传递、生长发育等方面具有重要作用。
测定原理：
磷脂酶 C 催化水解 NPPC 产生对硝基苯酚，在 410nm 处有特征吸收峰。
需自备的仪器和用品：
天平、研钵、超速冷冻离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、恒温水浴锅。
试剂组成和配制：
提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 55mL× 1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 25mL × 1 瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体 20mL×1 瓶，4℃保存。
酶液提取：
1、组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为 1 ：5~10 的比例（建议称取约 0.1g ，加入 1mL 提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于
4℃, 10000g 离心 5min ，取全部上清于 4℃、100000g 离心 30min ，弃上清，取沉淀溶于 1mL 试剂一。
2、细胞：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为 500~1000 ：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL提取液），冰浴超声波
破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后于4℃ , 10000g离心 5min ，取全部上清于 4℃、100000g 离心
30min，弃上清，取沉淀溶于 1mL 试剂一。
3、血清：直接测定。
测定操作：
| 空白管 | 测定管 |
样品(μL） | | 100 |
试剂一 (μL） | 100 | |
试剂二(μL） | 500 | 500 |
充分混匀，37℃反应 30min |
试剂三(μL） | 400 | 400 |
充分混匀，于 1mL 玻璃比色皿，蒸馏水调零，测定 410nm 处吸光值，分别记为 A 空白管和 A 测定管，△A=A测定管-A 空白管。 |
酶活计算公式：
标准曲线：y= 0.0191x - 0.0103 ，R2 = 0.9991
1、按照蛋白浓度计算：
酶活性定义：每毫克蛋白每分钟水解 NPPC 产生 1nmol 对硝基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。 PLC 活性（nmol/min/mg prot）= (△A+0.0103）÷ 0.0191×V 反总÷(V 样×Cpr) ÷T= 17.45× (△A+0.0103）÷ Cpr
2、按照样本质量计算：
每克组织每分钟水解 NPPC 产生 1nmol 对硝基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。 PLC 活性（nmol/min/g 鲜重)= (△A+0.0103)÷0.0191×V 反总÷(V 样÷V 样总×W) ÷T= 17.45× (△A+0.0103）÷ W
3、按照细胞数量计算：
酶活性定义：每 10⁴个细胞每分钟水解 NPPC 产生 1nmol 对硝基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。 PLC 活(nmol/min/10⁴cell)= (△A+0.0103）÷ 0.0191×V 反总÷(V 样÷V 样总×细胞数量) ÷T= 17.45× (△A+0.0103÷ 细胞数量
4、按照液体体积计算：
酶活性定义：每毫升血清每分钟水解 NPPC 产生1nmol 对硝基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。PLC活性(nmol/min/mL)= (△A+0.0103）÷ 0.0191×V 反总÷V 样÷T= 17.45× (△A+0.0103）V 反总：反应总体积，1mL；V 样：加入样本体积，0.1mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，30min
