测定意义：
植物细胞壁中的果胶是植物初生细胞壁的主要成分，除了起结构支撑、物质运输等作用外，还具有抵抗逆境的作用。果胶甲酯化程度影响了细胞壁的坚韧程度及其抗性。
测定原理：
果胶甲酯键经皂化处理后释放出甲醇，甲醇与 2,4-戊二酮反应显色，在 412nm 下测定吸光值；同时半乳糖醛酸在 70℃下与浓硫酸反应生成 5-甲酰基-2-呋喃甲酸，5-甲酰基-2-呋喃甲酸与 3,5-二甲基苯酚反应产生有色物质，在 450nm 下有最大吸光值。以甲醇生成量与半乳糖醛酸含量的比值代表果胶甲酯化程度。
需自备的仪器和用品：
天平、低温离心机、酶标仪、96 孔板、恒温水浴锅、蒸馏水、硫酸。
试剂的组成和配制：
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体3mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体3mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体3mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂四：液体2.5mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂五：粉剂×1瓶，4℃避光保存；临用前加入 22mL 试剂六充分溶解待用，用不完的试剂 4℃避光保存。
试剂六：液体25mL×1瓶，4℃保存。
试剂七：液体3mL×1瓶，4℃保存。
试剂八：液体2.5mL×1瓶，4℃避光保存。
酶液提取：
称取约 0.1g 组织，加入1mL 蒸馏水，进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min ，弃上清，留沉淀。沉淀中加入1mL 提取液，混匀后 90℃水浴 2h，冷却至室温，10000g4℃离心 10min，取上清待测。
测定操作表：
1、甲醇生成量测定：
试剂名称(µL） | 空白管 | 测定管 |
样本 | | 50 |
提取液 | 50 | |
试剂一 | 25 | 25 |
混匀，室温静置 30min |
试剂二 | 25 | 25 |
试剂二 | 20 | 20 |
混匀，冰浴至紫色褪去，约需要 15-30min |
试剂四 | 20 | 20 |
水 | 60 | 60 |
试剂五 | 200 | 200 |
混匀，60℃反应15min。取200μL加入96 孔板，测定412nm下吸光值A测定与A空白△A1=A测定-A空白。 |
2、半乳糖醛酸含量测定：
试剂名称(µL） | 测定管 |
样本 | 25 |
试剂七 | 25 |
浓硫酸 | 浓硫酸 |
0℃水浴 10min，冷却至室温 |
试剂八 | 20 |
充分混匀，静置10min后取 200μL于96孔板测定450nm处吸光值A1与 400nm吸光值A2，△A2=A1-A2。 |
计算公式：
1、甲醇生成量计算
标曲为 y = 0.0298x + 0.009 ，R2 = 0.9997；x 为标准品浓度，μmol/mL；y 为吸光值△A1。甲醇生成量(μ mol/g 鲜重）=（ A1-0.009） ÷0.0298÷W×V 样总=33.56×（A1-0.009）÷W。
2、半乳糖醛酸含量计算
标准曲线为y= 0.2585x - 0.1746，R2= 0.9986；x为标准品浓度，μmol/mL；y为吸光值△A2。半乳糖醛酸(μmol/g鲜重）=( A2+0.1746) ÷0.2585÷W×V 样总 =3.87× (A2+0.1746)÷W。果胶甲酯化程度（%）=甲醇生成量÷半乳糖醛酸含量×100%。V样总：加入提取液体积，1mL；W，样本质量，g。
