测定意义：
植物细胞壁中的果胶是植物初生细胞壁的主要成分，除了起结构支撑、物质运输等作用外，还具有抵抗逆境的作用。果胶甲酯化程度影响了细胞壁的坚韧程度及其抗性。
测定原理：
果胶甲酯键经皂化处理后释放出甲醇，甲醇与 2,4-戊二酮反应显色，在 412nm 下测定吸光值；同时半乳糖醛酸在 70℃下与浓硫酸反应生成 5-甲酰基-2-呋喃甲酸，5-甲酰基-2-呋喃甲酸与 3,5-二甲基苯酚反应产生有色物质，在 450nm 下有最大吸光值。以甲醇生成量与半乳糖醛酸含量的比值代表果胶甲酯化程度。
需自备的仪器和用品：
天平、低温离心机、分光光度计、1mL 玻璃比色皿、恒温水浴锅、蒸馏水、硫酸。
试剂的组成和配制：
提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体6mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体6mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体4mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂四：液体4mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂五：粉剂 ×1瓶，4℃避光保存；临用前加入 32mL 试剂六充分溶解待用，用不完的试剂 4℃避光保存。
试剂六：液体35mL×1瓶，4℃保存。
试剂七：液体4mL×1瓶，4℃保存。
试剂八：液体3mL×1瓶，4℃避光保存。
酶液提取：
称取约 0.1g 组织，加入 1mL 蒸馏水，进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min ，弃上清，留沉淀。沉淀中加入 1mL 提取液，混匀后 90℃水浴 2h，冷却至室温，10000g4℃离心 10min，取上清待测。
测定操作表：
1、甲醇生成量测定：
试剂名称(µL） | 空白管 | 测定管 |
样本 | | 150 |
提取液 | 150 | |
试剂一 | 75 | 75 |
混匀，室温静置 30min |
试剂二 | 75 | |
试剂二 | 60 | 60 |
混匀，冰浴至紫色褪去，约需要 15-30min |
试剂四 | 60 | 60 |
水 | 180 | 180 |
混匀，室温反应 1h |
试剂五 | 600 | 600 |
混匀，60℃反应 15min。取 200 μL 加入 96 孔板，测定 412nm 下吸光值 A。测定与A空白。△A1=A 测定-A空白 |
2、半乳糖醛酸含量测定：
试剂名称(µL） | 测定管 |
样本 | 60 |
试剂七 | 60 |
浓硫酸 | 960 |
70℃水浴 10min，冷却至室温 |
试剂八 | 48 |
充分混匀，静置 10min后取 1mL 于1mL 玻璃比色皿测定 450nm 处吸光值 A1与400nm 吸光值 A2，△A2=A1-A2。 |
计算公式：
1、甲醇生成量计算
标曲为 y = 0.0596x + 0.009 ，R2 = 0.9997；x为标准品浓度，μmol/mL；y为吸光值△A1。甲醇生成量 (μmol/g鲜重）=(A1-0.009）÷ 0.0596÷W×V样总=16.78×(A1-0.009）÷W。
2、半乳糖醛酸含量计算
标准曲线为 y = 0.517x - 0.1746，R2 = 0.9986；x为标准品浓度，μmol/mL；y 为 吸光值 △A2。半乳糖醛酸。(μmol/g鲜重)=( A2+0.1746)÷0.517÷W×V样总=1.93×(A2+0.1746)÷W果胶甲酯化程度（%）=甲醇生成量÷半乳糖醛酸含量×100% V 样总：加入提取液体积，1mL；W，样本质量，g。
