铜蓝蛋白(Cp)含量检测试剂盒 ; 100T/48S
测定意义:
铜蓝蛋白是血浆的含铜蛋白,有运输铜的功能,同时具有氧化酶的活性,是细胞外液重要的抗氧化剂。
测定原理:
铜蓝蛋白催化 3,3,,5,5,-四甲基联苯胺生成蓝色产物,在645nm处有特征吸收峰,依此可得铜蓝蛋白活。
自备实验用品及仪器:
天平、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体10mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体7mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:液体15mL×1瓶,4℃避光保存。(使用前37℃预热)
样本前处理:
1、血清(浆)等液体样本:直接检测。
2、动植物组织样本:称取约0.1g组织,加入1mL蒸馏水,进行冰浴匀浆。10000g ,4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
测定操作表:
1、分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至645nm,蒸馏水调零。
2、操作表
计算公式:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、按体积计算
酶活定义 : 37℃条件下,每分钟每毫升样品与底物作用吸光度升高0.01为一个酶活单位。
Cp活力(U/mL)=ΔA×V反总÷0.01÷V样÷T= 33.33×ΔA
2、按鲜重计算
单位定义:37℃条件下,每分钟每克样品与底物作用吸光值升高0.01为一个酶活单位。
Cp活力(U/g鲜重)=ΔA×V反总÷0.01÷(W×V样÷V 样总)÷T= 33.33×ΔA÷W
3、按蛋白浓度计算
单位定义:37℃条件下,每分钟每毫克蛋白样品与底物作用吸光值升高0.01为一个酶活单位。
Cp活力(U/ mg prot)=ΔA×V反总÷0.01÷(Cpr×V 样)÷T = 33.33×ΔA÷CprV 样:0.03mL;V 反总:0.3 mL;T:
反应时间,30min ;V样总:加入提取 液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g
b. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、按体积计算
酶活定义 : 37℃条件下, 每分钟每毫升样品与底物作用吸光度升高0.005为一个酶活单位。
Cp活力(U/mL)=ΔA×V反总÷0.005÷V 样÷T = 66.66×ΔA
2、按鲜重计算
单位定义:37℃条件下,每分钟每克样品与底物作用吸光值升高0.005为一个酶活单位。
Cp 活力(U/g 鲜重)=ΔA×V反总÷0.005÷(W×V样÷V样总)÷T= 66.66×ΔA÷W
3、按蛋白浓度计算
单位定义:37℃条件下,每分钟每毫克蛋白样品与底物作用吸光值升高 0.005为一个酶活单位。
Cp活力(U/ mg prot)=ΔA×V 反总÷0.005÷(Cpr×V 样)÷T = 66.66×ΔA÷CprV 样:0.03mL;V 反总:0.3 mL;T:
反应时间,30min ;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g
注意事项:
试剂二和试剂三有一定的毒性和刺激性,请操作时做好防护措施。