葡萄糖6磷酸酶(G6P)检测试剂盒说明书
测定意义：
葡萄糖-6-磷酸酶（(glucose 6 phosphatase ，G6Pase ，EC 3.1.3.9）广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中，是糖异生过程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶，在保证血糖的动态平衡方面起着重要的作用。
测定原理：
G6P 催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖，变旋酶和葡萄糖脱氢酶进一步依次催化 NAD⁺还原生成 NADH ，在340nm 下测定 NADH 生成速率，即可反映 G6P 活性。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
提取液：60mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体 47.5 mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1支， -20℃保存；
试剂三：粉剂×1支， -20℃保存；
试剂四：试剂×1支， -20℃保存；
样本的前处理：
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为 500~1000 ：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W ，超声 3s ，间隔 10s ，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1 ：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2、工作液的配制：临用前将试剂二、试剂三和试剂四转移到试剂一中混合溶解用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
3、将工作液置于 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)预热 5 分钟。
4、在 1mL 石英比色皿中加入 50μL 样本和 950 μL 工作液，立即混匀，记340nm 处初始吸光值 A1 和2min 后的吸光值 A2 ，计算 ΔA=A2-A1。
G6P 活性计算：
1、血清（浆）G6P 活力计算
单位定义：每毫升血清（浆）每分钟生成 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
G6P（nmol/min/mL））＝[ΔA×V 反总÷ (ε×d）×10⁹]÷V 样÷T=1608×ΔA
2、按样本鲜重计算
单位定义：每g组织每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
PC(nmol/min /g鲜重)＝[ΔA×V 反总÷ (ε×d)×10⁹]÷(W×V 样÷V 样总)÷T=1608×ΔA÷W
3、按细菌或细胞密度计算：
单位定义：每1万个细菌或细胞每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
PC(nmol/min /10⁴ cell)＝[ΔA×V 反总÷(ε×d)）×10⁹]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=3.215×ΔAV 反总：反应体系总体积，1×10-3 L；ε ：NADH摩 尔消光系数，6.22×10³ L /mol /cm；d： 比色皿光径， 1cm；V 样：加入样本体积，0.05 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时 间，2 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。
注 意：
在该试剂盒中，若 ΔA 大于 0.3 ，需将样本用提取液稀释适当倍数后测定，使 ΔA 小于 0.3 可提高检测灵敏度。计算公式中乘以相应稀释倍数。
