羟自由基清除能力检测试剂盒 ; 100T/96S
测定意义:
羟自由基作用于体内蛋白质、核酸、脂类等生物分子,造成细胞结构和功能受损,进而导致体内代谢紊乱引起疾病。羟自由基清除能力是样品抗氧化能力的重要指标之一,在抗氧化类保健品和药品研究中得到广泛应用。
测定原理:
H2O2/ Fe²+通过Fenton反应产生羟自由基,将邻二氮菲- Fe²+水溶液中 Fe²+氧化为Fe³+,导致536nm吸光度下降,样品对536nm吸光度下降速率的抑制程度,反映了样品清除羟自由基的能力。
自备实验用品:
恒温水浴锅、酶标仪、96孔板和蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液:液体100 mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体12mL×1瓶,4℃避光保存。
试剂二:液体6mL×1瓶,4℃避光保存。
试剂三:液体12 mL×1瓶,4℃保存。
试剂四:液体6mL×1瓶,4℃保存。
样品的制备:
1、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10的比例(建议称取约0.1g 组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后10000g ,4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、血清、果汁等液体样品可直接测定。
3、提取物(或者药物)可配制成一定浓度,如5mg/mL。
空白管
对照管
测定管
工作液(µL)
250
混匀,防止局部颜色过浓
样品(µL)
50
试剂四(µL)
H2O(µL)
100
混匀,37℃保温 60min ,8000g 25℃离心 5min ,吸取 200μL于 96孔板中测定 536nm 处吸光值,空白管、对照管和测定管的吸光值分别记为 A空、A对和 A测。
计算公式:
羟自由基清除率D% =(A 测-A对)÷(A空-A对)×100%A空、A对、A测:空白管、对照管和测定管的吸光值。
注意事项:
为了比较不同样品羟自由基清除能力,对于同一批样品必须加入等量的样品,血清、组织匀浆、果汁等液体样品加入同样体积,提取物(或者药物)配制成同样浓度。