莽草酸脱氢酶(SD)检测试剂盒 ; 100管/96样
测定意义：
莽草酸途径是存在于植物、真菌和微生物中的一条重要的代谢途径，莽草酸脱氢酶是莽草酸合成途径中的关键酶。
测定原理：
莽草酸脱氢酶催化莽草酸和 NADP 产生 NADPH ，检测 340nm 下的吸光值增加速率来表示 SD 活性。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体 25mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×2 瓶，4℃保存；
粗酶液提取：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为 500~1000 ：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W ，超声 3s ，间隔 10s ，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1 ：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1 、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2 、样本测定
(1）在试剂二中加入 10mL 试剂一充分溶解混匀，置于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 5min，现配现用。
(2）在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 样本和 190μL 试剂二，混匀，立即记录 340nm 处 20s 时的吸光值 A1 和 5min20s 后的吸光值 A2 ，计算 ΔA=A2-A1。
SD 活性计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、按样本质量计算
单位的定义：
每 mg 组织蛋白每分钟产生 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
SD(nmol/min/mg prot)＝[ΔA×V 反总÷ (ε×d）×10⁹]÷(V 样×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr
2、按按样本蛋白浓度计算
单位的定义：
每 g 组织每分钟产生 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
SD(nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷ (ε×d）×10⁹]÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T=643×ΔA÷W
3、按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：
每 1 万个细菌或细胞每分钟产生 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
SD(nmol/min/10⁴ cell)＝[ΔA×V 反总÷ (ε×d）×10⁹]÷(500×V 样÷V 样总) ÷T=1.286×ΔAV 反总：反应体系总体积，2×10
- 4L；ε ：NADH 摩尔消光系数，6.22×10³ L / mol /cm;d：比色皿光径,1cm；V 样：加入样本体积,0.01mL;V 样总：加入提取液
体积,1 mL;T：反应时间,5min;Cpr：样本蛋白度,mg/mL; W：样本质量,g;500细菌或细胞总数,500万。
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
1、按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：
每mg 组织蛋白每分钟产生 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
SD(nmol/min/mg prot)＝[ΔA×V 反总÷ (ε×d）×10⁹]÷(V 样×Cpr) ÷T=1286×ΔA÷Cpr
2、按样本鲜重计算：
单位的定义：
每 g 组织每分钟产生 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
SD(nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷ (ε×d）×10⁹]÷(W× V 样÷V 样总) ÷T=1286×ΔA÷W
3、按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：
每 1 万个细菌或细胞每分钟产生 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
SD(nmol/min/10⁴ cell)＝[ΔA×V 反总÷ (ε×d）×10⁹]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=2.572×ΔAV 反总：反应体系总体积，2×10
-4L；ε ：NADH 摩尔消光系数，6.22×10³ L / mol /cm；d：96孔板光 径,0.5cm；V 样：加入样本体积，0.01 mL；V 样总：加
入 提取液体积，1mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋质白浓度,mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数,500万。
