游离胆固醇(FC)含量检测试剂盒 ; 100T/96S
测定意义：
FC是构成细胞膜的主要成分，也是合成肾上腺皮质激素、性激素、胆汁酸及维生素 D等生理活性物质的重要原料。FC 浓度可作为脂代谢的指标。
测定原理：
FC氧化酶催化 FC 生成△4-胆甾烯酮和 H2O2，过氧化物酶催化 H2O2、4-氨基安替比林和酚生成红色醌类化合物，在 500nm 有吸收峰，其颜色深浅与FC含量成正比。
自备的仪器和用品：
水浴锅、可调式移液枪、酶标仪、96 孔板、异丙醇和蒸馏水。
试剂组成和配置：
试剂一：异丙醇 100mL(自备)；
试剂二：液体20mL×1 瓶，4℃保存；
试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存；
试剂四：液体 40μL×1 瓶，4℃保存。
标准品：液体1mL×1支，0.5μmol/mL ，4℃保存。
FC的提取：
1、组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1 ：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。8000g ，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。
2、细菌、真菌：先收集 400-500 万细胞或细菌到离心管内，弃上清，加 1mL 试剂一，超声波破碎 1min（强度 20％，超声2s ，停1s），即FC待测液。
3、血清（浆）样品：直接测定。
测定操作：
1、分光光度计预热30 min，调节波长到500nm。
2、FC工作液的配制：临用前，吸取约0.8mL试剂二分别加入试剂三和试剂四瓶中，充分溶解后再全部转移回试剂二瓶中，充分混匀，FC工作液置于37℃水浴10min 。用不完的工作液 4℃保存一周。
3、标准管：依次在96孔板中加入20μL FC标准液和 180μLFC工作液，混匀，37℃静置 3h 后于500nm测定 A 标准管。
4、测定管：依次在96孔板中加入 20μLFC待测液和 180μLFC工作液，混匀，37℃静置 3h 后于 500nm 测定 A 测定管。
5、空白管：依次在 96 孔板中加入 20μL 试剂一和 180μL FC 工作液，混匀，37℃静置 3h 后于500nm 测定A测定管。
计算公式：
1、血清(浆)中FC含量计算：
FC 含量(μmol/dL)=C标准液×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)×100mL=50×(A 测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)C标
准液：0.5μmol/mL；100 mL：1dL=100mL。
2、组织中FC含量计算：
(1) 按样本蛋白浓度计算
FC 含量(μmol /mg prot)= C标准液×(A 测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr=0.5×(A 测定管-A空白管)÷(A标准管-A空
白管)÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算
FC含量(μmol/g 鲜重)=C标准液×(A 测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)÷WC标准液：0.5μmol/mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg
/mL；W：样本质量，g/mL
3、细胞、细菌中FC含量计算：
FC含量 (μmol /10⁴cell)=C标准液×(A测定管-A 空白管)÷(A标准管-A空白管)÷细菌或细胞(10⁴cell /L)=0.5×(A 测定管-A 空白管)
÷(A标准管-A空白管)÷细菌或细胞(10⁴cell /L)C 标准管：0.5μmol/mL。最低检出限为 1nmol/m。
注 意：
1、标准管和空白管只需测定一次。
2、若测定管产生白色浑浊，可以将待测液用异丙醇稀释 2~5 倍后测定，并在最后结果乘以相应倍数。
