尿酸(UA)含量检测试剂盒 ; 50管/48样
测定意义:
UA是鸟类和爬行类动物的主要代谢产物,正常人体尿液中产物主要为尿素,含少量尿酸。此外,UA还是重要的抗氧化剂,能清除超氧化物,羟自由基等。体内UA生成量和排泄量不平衡会导致多种疾病的发生。例如,血中UA升高会引起痛风、肾功能损害和动脉硬化,相反UA降低会引起恶性贫血,在临床诊断上具有重要的意义。
测定原理:
尿酸酶能催化 UA生成尿囊素,CO2及H2O2 ,H2O2氧化亚铁氰化钾中的Fe²+生成Fe³+,Fe³+进一步与酚和4-氨基安替比林缩合生成红色醌类化合物,在505nm下有特征吸收峰,测定反应体系505nm的吸收值,可计算尿酸的含量。
自备实验用品及仪器:
恒温水浴锅、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
缓冲液:液体15mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:
A. 用于标准管和测定管,粉剂1瓶,4℃避光保存,使用前加10mL缓冲液溶解。
B. 用于空白管,粉剂1瓶,4℃避光保存,使用前加5mL缓冲液溶解。
试剂二:
粉剂1瓶,4℃避光保存,使用前加10mL双蒸水水置于60℃加热溶解。
样品的制备:
1、动植物组织:建议称取约 0.1g组织,加入1mL生理盐水或蒸馏水,进行冰浴匀浆,然后8000g,4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、血清,培养液:直接检测。
测定操作表:
| 标准管 | 空白管 | 测定管 |
试剂名称(μL) | A, 200 | B, 200 | A, 200 |
蒸馏水 H2O(μL) | 600 | 800 | 600 |
试剂二(μL) | 200 | | |
样品(µL) | | | 200 |
混匀,37℃水浴30min,于1mL玻璃比色皿,空白管调零,测定505nm处各管吸光值,标准管和空白管只需做一管。 |
UA含量计算公式:
1、组织:
(1)按样本重量计算
尿酸含量 (μmol/g鲜重)=C标准品×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)÷(W÷V样总)=0.5×(A测定管-A空白管)÷(A标准管 -A空白管)÷W
(2)按样本蛋白浓度计算
尿酸含量 (μmol/mg prot)=C标准品×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)÷ Cpr =0.5×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A
空白管)÷Cpr尿酸 (μmol/L)= C 标准品×(A测定管-A空白管) ÷ (A标准管-A空白管) ×103 =500×(A测定管-A 空白管)÷(A标
准管-A空白管)C 标:标准品浓度 0.5μmol/mL;V样总:加入提取液体积,1mL;W:样品质量,g;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;103
:1μmol / L=103 μmol/mL
注意事项:
1、血清样本请在24小时内测定,或者 4℃密封避光保存不超过72小时。
2、吸光值大于0.8可用蒸馏水稀释样本,并在计算公式中算入稀释倍数。
3、最低检出限为10μmol/L。