果糖1,6二磷酸酶(FBP)/果糖1,6二磷酸酯酶检测试剂盒 ; 100管/96样
测定意义：
果糖-1,6 二磷酸酶又称果糖 1,6 二磷酸酯酶，催化 1,6 二磷酸果糖和水生成 6 磷酸果糖和无机磷，在糖的异生代谢和光合作用同化物蔗糖的合成中起关键性的作用。
测定原理：
FBP 催化 1,6 二磷酸果糖和水生成 6 磷酸果糖和无机磷，在反应体系中添加的磷酸葡萄糖异构酶和 6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成 6-磷酸葡萄糖酸和 NADPH ，340nm 下测定 NADPH 增加速率，即可计算 FBP活性。
需自备的仪器和用品：
分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
提取液一：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。
提取液二：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂×1瓶， -20℃保存；临用前加入 20mL 试剂四充分溶解待用，用不完的试剂 4℃保存；
试剂二：液体 7.2μL×1 支，4℃保存；临用前加入 1mL 蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂 4℃保存；
试剂三：粉剂×1支， -20℃保存；临用前加入 1mL 蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂 4℃保存；
试剂四：液体 25mL×1 瓶， 4℃保存；
样本的前处理：
①总 FBP 酶提取：建议称取约 0.1g 样本，加入 1mL 提取液一，冰浴匀浆后超声破碎（冰浴，200W ，破碎3s ，间歇 7s ，总时间 1min），然后 4℃ , 8000g 离心 10min，取上清测定。
②胞浆和叶绿体 FBP 酶的分离：按照植物组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1 ：5～10 的比例（建议称取约 0.1g 样本，加入 1mL 提取液一），冰浴匀浆后于 4℃ , 200g 离心 5min ，弃沉淀，取上清在 4℃ , 8000g离心 10min ，取上清用于测定胞浆 FBP 酶活性，取沉淀加 1mL 提取液二，震荡溶解后超声破碎（冰浴， 200W，破碎 3s ，间歇 7s ，总时间 1min），然后 4℃ , 8000g 离心 10min ，取上清测定叶绿体中 FBP 酶活性。建议测定总 FBP 酶活性，按照步骤①提取粗酶液，若需要分别测定胞浆和叶绿体中的 FBP ，则按照步骤②提取粗酶液。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2、将试剂一、二、三 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)预热 10 分钟。
3、加样表：
试剂名称(μL） | 测定管 |
样本 | 20 |
试剂二 | 10 |
试剂三 | 10 |
试剂一 | 160 |
将上述试剂按顺序加入微量石英比色皿或 96 孔板中，立即混匀，加入最后一个试剂的同时开始计时，在 340 nm 波长下记录反应 1min 后吸光度 A1 和反应 6min 后的吸光度 A2 ，计算 ΔA=A2-A1。
FBP活性计算：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位的定义：
每 mg 组织蛋白每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
FBP(nmol/min/mg prot)＝[ΔA×V 反总÷(ε×d）×10⁹]÷(V 样×Cpr)÷T=321.5×ΔA÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算
单位的定义：
每 g 组织每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
FBP(nmol/min/g鲜重)＝[ΔA×V 反总÷ (ε×d）×10⁹]÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T=321.5×ΔA÷WV 反总：反应体系总体积，2×10
-4L;ε :NADPH 摩尔消光系数，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿光径， 1cm；V 样：加入样本体积，0.02 mL；V 样总：加入
提取液体积,1 mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位的定义：
每mg组织蛋白每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
FBP(nmol/min/mg prot)＝[ΔA×V 反总÷ (ε×d）×10⁹]÷(V样×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算
单位的定义：
每g组织每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
FBP(nmol/min/g鲜重）＝[ΔA×V 反总÷(ε×d)×10⁹]÷(W ×V 样÷V样总)÷T=643×ΔA÷WV 反总：反应体系总体积，2×10-4
Lε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×10³ L / mol /cm；d：96 孔板光径，0.5cm；V 样：加入样本体积，0.02mL；V 样总：加入
提取液体积，1 mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g
