肉桂醇脱氢酶(CAD)检测试剂盒 ; 100管/96样
测定意义：
CAD 是木质素生物合成途径中的关键酶之一，是木质素单体合成反应中的最后一步，催化多种不同的肉桂醛（香豆醛、芥子醛以及松柏醛等）生成与之相应的肉桂醇。该酶多存在于高等植物、酵母、菌类中，研究该酶可以探讨多种生物细胞发育过程中木质素沉积的代谢机理，为减少水果石细胞含量提高其品质提供依据。
测定原理：
CAD 催化肉桂醇和 NADP 生成肉桂醛和 NADPH ，在 340nm 下测定 NADPH 生成速率，即可反映 CAD 活性。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：100mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体 25 mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×2 瓶，-20℃保存；
粗酶液提取：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000 ：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W ，超声 3s ，间隔 10s ，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1 ：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2、样本测定
(1) 在试剂二中加入 10mL 试剂一充分溶解混匀，室温使用涡旋振荡仪振荡溶解 15min，如未溶解可适当延长振荡时间；置于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 5min；现配现用（配好后24h 内用完）；
(2) 在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 样本和 190μL 试剂二，混匀，立即记录 340nm 处初始吸光值 A1 和 5min 后的吸光值 A2 ，计算 ΔA=A2-A1。
CAD 活性计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：
每 mg 组织蛋白每分钟产生 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
CAD(nmol/min/mg prot)＝[ΔA×V 反总÷ (ε×d）×10⁹]÷(V 样×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：
每 g 组织每分钟产生 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
CAD(nmol/min/g 鲜重)＝[ΔA×V 反总÷ (ε×d）×10⁹]÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T=643×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：
每 1 万个细菌或细胞每分钟产生 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
CAD(nmol/min/10⁴ cell)＝[ΔA×V 反总÷ (ε×d）×10⁹]÷(500×V 样÷V 样总) ÷T=1.286×ΔAV 反总：反应体系总体积，2×10
- 4L；ε ：NADPH 摩尔消光系数，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿光径,1cm；V 样：加入样本体积，0.01 mL;V 样总：加
入提取液体积,1 mL;T:反应时间，5min:Cpr：样本蛋白质浓度,mg/mL;W;样本质量，g;500:菌或细胞 总数,500万。
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
(1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：
每 mg 组织蛋白每分钟产生 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
CAD(nmol/min/mg prot)＝[ΔA×V 反总÷ (ε×d）×10⁹]÷(V 样×Cpr) ÷T=1286×ΔA÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算：
单位的定义：
每 g 组织每分钟产生 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
CAD(nmol/min/g 鲜重)＝[ΔA×V 反总÷ (ε×d）×10⁹]÷(W× V 样÷V 样总) ÷T=1286×ΔA÷W
(3) 按细菌或细胞密度计算：
CAD(nmol/min/10⁴ cell)＝[ΔA×V 反总÷ (ε×d)×10⁹]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=2.572×ΔAV 反总：应体系总体积，2×10-4L；
ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×10³ L / mol /cm；d：96 孔板径,0.5cm；V 样:加入样本体积，0.01 mL；V 样总:加入提取液体
积,1mL；T：反应 时间,5 min；Cpr：样本蛋白浓度mg/mL；W：样本质量,g；500：细菌或细胞总数,500万。
