谷胱甘肽S-转移酶(GST)检测试剂盒 ; 50管/48样
测定意义：
GST是一种具有多种生理功能的蛋白质家族，主要存在于细胞质内。GST是体内解毒酶系统的重要组成部分，主要催化各种化学物质及其代谢产物与GSH的巯基共价结合，使亲电化合物变为亲水物质，易于从胆汁或尿液中排泄，达到将体内各种潜在或具备毒性的物质降解并排出体外的目的。因此，GST在保护细胞免受亲电子化合物的损伤中发挥着重要的生物学功能。此外，因为GST具有GSH-Px 活性，亦称为non-Se GSH-Px ，具有修复氧化破坏的大分子如 DNA、蛋白质等的功能。注意，GST催化的反应减少GSH含量，但是不增加GSSG含量。
测定原理：
GST催化GSH与CDNB结合，其结合产物的光吸收峰波长为340nm；通过测定340nm波长处吸光度上升速率，即可计算出GST活性。
自备仪器和用品：
紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1mL 石英比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配置：
试剂一：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 45mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1瓶， 4℃保存。临用前加 5 mL 蒸馏水溶解。
粗酶液提取：
1、组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1 ：5~10的比例（建议称取约0.1g
组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。8000g ，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
2、细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：试剂一体积（mL）为 500~1000 ：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w ，超声 3 秒， 间隔 7 秒，总时间 3min）；然后8000g ，4℃ , 离心 10min，取上清置于冰上待测。
3、血清等液体：直接测定。
测定操作：
1、分光光度计预热 30 min ，调节波长到 340 nm，用蒸馏水调零。
2、试剂三放在 25℃（一般物种）或者 37℃（哺乳动物）保温。
3、测定管：取 1mL 石英比色皿，加入 100μL 上清液，900μL 试剂二和 100μL 试剂三，迅速混匀后于 340nm测定吸光度变化，记录 10 s 和 310 s 吸光度为 A1 和 A2。
4、血清等液体：直接测定。
GST活性计算公式：
(1). 按蛋白浓度计算
活性单位定义：
在 25℃或者 37℃中，每毫克蛋白每分钟催化 1nmol/L CDNB 与 GSH 结合为 1 个酶活单位。 GST(nmol/min/mg prot)
=(A2－A1))÷ε÷d×109×V反总÷(Cpr×V样)÷T=230×((A2-A1)÷Cpr
(2). 按样本质量计算
活性单位定义：
在 25℃或者 37℃中，每克样品每分钟催化 1nmol/L CDNB 与 GSH 结合为 1个酶活单位。 GST（nmol/min/g 鲜重）
=(A2-A1)÷ε÷d×109×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T=230×(A2-A1) ÷W
(3). 按细胞数量计算
活性单位定义：
在 25℃或者 37℃中，每 10⁴个细胞每分钟催化 1nmol/L CDNB 与 GSH 结合为 1 个酶活单位。
GST（nmol/min/10⁴cell）=(A2-A1)÷ε÷d×10⁹×V 反总÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T=230×(A2-A1) ÷细胞数量
(4). 按液体体积计算
活性单位定义：
在 25℃或者 37℃中，每毫升液体每分钟催化 1nmol/L CDNB 与 GSH 结合为 1 个酶活单位。 GST（nmol/min/mL）
=(A2-A1)÷ε÷d×10⁹×V 反总÷V 样÷T= 230×(A2-A1)ε：产物摩尔消光系数，9.6×10³L/mol /cm；d：比色皿光径，1cm；
10⁶：1mol=1×106μmol；V 反总：反应体系总体积，1100μL=0.0011 L；Cpr：上清液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外
测定，建议选用本公司生产的 BCA 蛋白质浓度测定试剂盒；V 样：加入反应体系中上清液体积，100μL=0.1 mL；V 样总：加
入提取液体积，1mL；W，样本质量，g；T：反应时间（min），5min。
注意事项：
1、样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日测定酶活力；
2、细胞中GST活性测定时，细胞数目须在300万-500万之间，细胞中GST的提取时可加试剂一后研磨或超声波处理，不能用细胞裂解液处理细胞；
3、本法测定GST活性的线性范围可达76μmol/min /L ，测定前先用1～2个样做预实验，如5min内反应不成线性，须对样品用蒸馏水稀释，计算结果乘以稀释倍数；
4、测定反映的温度对测定结果有影响，请控制在25℃或者37℃（哺乳动物）。
