抗坏血酸(AsA)/维生素C含量检测试剂盒 ; 100T/96S
测定意义：
AsA又称维生素C。AsA是辅酶、自由基清除剂、电子共体/受体和草酸盐与酒石酸盐生物合成的底物等。作为植物细胞中最重要的抗氧化剂，AsA在保护叶绿体免于氧化损伤起着举足轻重的作用，也是衡量农作物产品品质的重要指标之一。
测定原理：
抗坏血酸氧化酶（AAO）催化AsA氧化生成DHA，通过测定AsA的氧化速率，即可计算出AsA含量。
自备仪器和用品：
研钵、冰、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、可调式移液器和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体20mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体5μL×2瓶，4℃保存。临用前加入1.25 mL试剂二，混匀。
标准品：粉剂×1瓶（棕色），4℃保存。临用前配制，加入5.679 mL蒸馏水充分溶解；吸取0.1mL 上述溶液，加入0.9mL 蒸馏水，混匀，即100μmol/L AsA。
样品中AsA提取：
1、组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心20min，取上清置冰上待测。
2、细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；8000g。
3、血清等液体：直接测定。
AsA测定操作：
1、分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到265nm，蒸馏水调零。
2、试剂二在25℃水浴锅中预热30min。
3、标准管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL标准液、160μL试剂二和20μL试剂三，迅速混匀，在265nm测定，记录30s和150s的吸光值A1和A2，△A标准管= A1－A2。
4、测定管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL上清液、160μL试剂二和20μL试剂三，迅速混匀，在265nm测定，记录30s和150s的吸光值A3和A4，△A测定管= A3－A4。
注 意：标准管只需测定一次。
AsA 含量计算公式:
a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
(1). 按蛋白浓度计算
AsA (nmol/mg prot) =[C标准液×△A测定管÷△A标准管×V标准]÷(Cpr×V样)=100×△A测定管÷△A标准管÷Cpr
(2). 按样本质量计算
AsA(nmol/g鲜重) =[C标准液×△A测定管÷△A标准管×V标准]÷(W×V样÷V样总)=100×△A测定管÷△A标准管÷W
(3). 按细胞数量计算
AsA(nmol/10⁴cell) =[C 标准液×△A测定管÷△A标准管×V标准]÷(细胞数量×V样÷V 总)=100×△A测定管÷△A标准管÷细胞数量
(4). 按液体体积计算
AsA (nmol/mg prot) =[C 标准液×△A测定管÷△A标准管×V标准]÷V样=100×△A测定管÷△A标准管C标准液：100μmol/L；
V样总：上清液总体积，1.0 mL=1×10-³L; Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量g）。
b. 使用96孔板测定的计算公式如下
(1). 按蛋白浓度计算
AsA(nmol/mg prot) =[C标准液×△A测定管÷△A标准管×V标准]÷（Cpr×V样)=100×△A测定管÷△A标准管÷Cpr
(2). 按样本质量计算
AsA(nmol/g鲜重) =[C标准液×△A测定管÷△A标准管×V标准]÷(W×V样÷V样总)=100×△A 测定管÷△A标准管÷W
(3). 按细胞数量计算
AsA(nmol/10⁴cell) =[C标准液×△A测定管÷△A标准管×V标准]÷(细胞数量×V样÷V总)=100×△A测定管÷△A标准管÷细胞数量
(4). 按液体体积计算
AsA (nmol/mL) =[C标准液×△A测定管÷△A标准管×V标准]÷V样=100×△A测定管÷△A标准管C标准液：100μmol/L;V样总：
上清液总体积，1.0 mL=1×10-³L; Cpr:上清液蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量（g）。
注意事项：
1、试剂三和标准品现配现用，配制好的4℃保存，3天内使用完。
2、最低检出限为 10μmol/L。
