总巯基检测试剂盒 ; 100T/48S
测定意义：
生物体内巯基主要包括谷胱甘肽巯基和蛋白质巯基。前者不仅能够修复氧化损伤的蛋白质，而且参与活性氧清除，后者对于维持蛋白质构象具有重要作用。通过测定总巯基含量和 GSH 含量，能够间接测定蛋白质巯基含量。
测定原理：
巯基基团与5,5’-二硫代-双-硝基苯甲酸（DTNB）反应，生成黄色化合物，在412nm处有最大吸收峰。
自备实验用品：
天平、研钵、恒温水浴锅、酶标仪、96孔板、乙醇和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体18mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体1mL×1管，4℃避光保存。
样品的制备：
1、按照组织质量（g）：水体积(mL)为 1 ：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入 1mL 蒸馏水）进行冰浴匀浆，然后8000g ，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清，培养液：稀释5倍后测定，可取0.1mL样本，加入0.4mL蒸馏水，混匀，置冰上待测。
操作步骤：
1、酶标仪预热30min ，调节波长至412nm。
2、操作表
在 96 孔板中加入如下试剂
| 对照管 | 测定管 |
样品(μL） | 40 | 40 |
试剂一(μL） | 150 | 150 |
试剂二(μL） | | 10 |
乙醇(μL） | 10 | |
混匀，25℃静置10min ，测定412nm吸光值。ΔA=A测定-A对照。每个测定管设一个对照管。 |
计算公式:
总巯基标准曲线：y=1.8111x - 0.0037，R²=1，x为标品浓度，单位μmol/mL ，y为吸光度ΔA。
1、组织：
(1）按样本重量计算
总巯基含量(μmol/g鲜重）= (ΔA+0.0037）÷1.8111×V样总÷W=0.552× (ΔA+0.0037）÷W
(2）按样本蛋白浓度计算
总巯基含量(μmol/mg prot）= (ΔA+0.0037）÷1.8111×V样总÷Cpr=0.552× (ΔA+0.0037）÷Cpr
2、血清、培养液：
总巯基含量(μmol/L）= (ΔA+0.0037）÷1.8111×5×10³=2761× (ΔA+0.0037）V 样总：加入提取液体积，1mL；W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；5：血清，培养液等液体样本稀释倍数；10³：1mmol/ L=10³μmol/L。
注意事项：
最低检出限为10μmol/L。
