二胺氧化酶(DAO)检测试剂盒 ; 100T/48S
测定意义：
DAO(EC1.4.3.6)广泛存在于动物（肠粘膜、肺、肝脏、肾脏等）、植物和微生物中。催化多胺氧化为醛，其活性与核酸和蛋白合成密切相关，能够反映肠道机械屏障的完整性和受损伤程度。
测定原理：
DAO催化尸胺产生醛和过氧化氢，外源添加过量的辣根过氧化物酶，催化过氧化氢氧化邻联茴香胺生成氧化型邻联茴香胺，在460nm处有特征吸收峰，通过测定该波长吸光度增加速率，计算DAO活性。
需自备的仪器和用品：
天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水。
试剂的组成和配制：
提取液：液体120mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体0.3mL×1支，4℃保存。
试剂二：液体2.5mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体1.2mL×1管，4℃保存。
粗酶液提取：
1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1 ：5~10的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃离心20min，取上清，置冰上待测。
2、细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000 ：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液）， 冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g ，4℃, 离心10min，取上清置于冰上待测。
3、血清等液体：直接测定。
测定步骤和操作表：
1、分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至460nm，蒸馏水调零。
2、操作表
| 对照管 | 测定管 |
粗酶液(μL） | 50 | 50 |
提取液(μL） | 128 | 108 |
试剂一 (μL） | 2 | 2 |
试剂二(μL） | 20 | 20 |
试剂三(μL） | | 20 |
混匀，37℃水浴30min，微量石英比色皿/96孔板，蒸馏水调零，测定460nm吸光值。ΔA=A测定-A对照。 |
酶活性计算公式：
a．用微量石英比色皿测定的计算公式如下
(1）按样本蛋白浓度计算
酶活性定义：
在pH7.2 ，温度为37℃条件下，每毫克组织蛋白每分钟催化产生1nmol H2O2 所需的酶量为一个酶活力单位（U）。
DAO活性(nmol/min/mg protV反总÷÷T=18×A460÷Cpr
(2）按样本质量计算：
酶活性定义：
在pH7.2 ，温度为 37℃条件下，每克组织每分钟催化产生1nmol H2O2 所需的酶量定义为一个酶活力单位。
DAO活性（nmol/min/g鲜重）V反总÷（V样÷V样总×W）÷T=18×A460÷W
(3）按细胞数量计算：
酶活性定义：
在pH7.2 ，温度为37℃条件下，每10⁴个细胞每分钟催化产生1nmol H2O2 所需的酶量定义为一个酶活力单位。
DAO活性（nmol/min/10⁴cellV反总÷（V样÷V样总×细胞数量）÷T=18×A460÷细胞数量
(4) 按液体体积计算
酶活性定义：
在pH7.2 ，温度为37℃条件下，每毫升血清每分钟催化产生1nmol H2O2 所需的酶量定义为一个酶活力单位。
DAO活性（nmol/min/mLV反总÷V样÷T=18×A460ε ：氧化型邻联茴香胺毫摩尔消光系数：7.5L/mmol/cm；d： 比色皿光
径,1cm；V反总：反应总体积，0.2mL；V样：反应中样本体积，0.05mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度,
mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，30min
b. 用96孔板测定的计算公式如下
(1）按样本蛋白浓度计算：
酶活性定义：
在pH7.2，温度为37℃条件下，每毫克组织蛋白每分钟催化产生1nmol H2O2 所需的酶量为一个酶活力单位（U）。
DAO活性（nmol/min/mgprotV反总÷÷T= 36×A460÷Cpr
(2）按样本质量计算：
酶活性定义：
在pH7.2 ，温度为37℃条件下，每克组织每分钟催化产生 1nmol H2O2 所需的酶量定义为一个酶活力单位。
DAO 活性（nmol/min/g鲜重）V反总÷（V样÷V样总×W）÷T= 36×A460÷W
(3）按细胞数量计算：
酶活性定义：
在pH7.2 ，温度为37℃条件下，每10⁴个细胞每分钟催化产生1nmol H2O2所需的酶量定义为一个酶活力单位。
DAO 活性（nmol/min/10⁴cell V反总÷（V样÷V样总×细胞数量）÷T=36×A460细胞数量
(4) 按液体体积计算
酶活性定义：
在pH7.2，温度为 37℃条件下，每毫升血清每分钟催化产生1nmol H2O2 所需的酶量定义为一个酶活力单位。
DAO 活性（nmol/min/mLV反总÷V 样÷T= 36×A460ε：氧化型邻联茴香胺毫摩尔消光系数：7.5L /mmol/cm；d：96孔板
光径，0.5cm ；V 反总：反应总体积，0.2mL；V样：反应中样本体积，0.05mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋
白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，30min
注意事项：
1、如果OD值小于0.01，适当加大提取用样本量；OD值大于0.8，粗酶液可适当稀释，或者减少提取用样本量。
2、样品蛋白质含量需要另外测定。
