锰过氧化物酶(MnP)检测试剂盒 ; 100T/96S
测定意义：
锰过氧化物酶（EC1.11.1.13 ）是一种含亚铁血红素的过氧化物酶，主要存在于担子菌中，属于木质素降解酶系，能有效的降解木质素及废水和土壤中比较难降解的氯化物，叠氮化合物、DTT，多环芳烃等。
测定原理：
锰过氧化物酶在 Mn2+存在的条件下，将愈创木酚氧化为四邻甲氧基连酚，在 465nm 有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器：
天平、研钵、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、恒温水浴锅。
试剂组成和配制：
试剂一：液体 110mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 2mL×1 支，4℃保存。
试剂三：液体 5mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂四：液体 2mL×1 支，4℃保存。
粗酶液提取：
1、组织：按照质量（g）：试剂一体积(mL)为 1 ：5~10 的比例（建议称取约 0.1g ，加入 1mL 试剂一）加入试剂一，冰浴匀浆后于 4℃, 10000g 离心 10min，取上清置于冰上待测。
2、细胞：按照细胞数量（10⁴个）：试剂一体积（mL）为 500~1000 ：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w ，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 4℃ , 10000g离心 10min，取上清置于冰上待测。
3、培养液或其它液体：直接检测。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 465nm，蒸馏水调零。
2、测定前将试剂一、二、三、四在 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）放置 10min 以上。
3、样本测定表
试剂名称(µL） | 测定管 |
样本 | 20 |
试剂一 | 100 |
试剂二 | 20 |
试剂三 | 40 |
试剂四 | 20 |
在微量石英比色皿或 96 孔板中按顺序加入上述试剂，立即混匀并计时，记录 465nm 下 30s 时的吸光值 A1和 2min30s 后的吸光值 A2 。计算 ΔA ＝A2-A1。 |
注意：若一次性测定样本较多，可将试剂一、二、三、四按比例配成混合液，在 37℃（哺乳动物）或 25℃ （其它物种）放置 10min 以上，测定时加入 20µL 样本和 180µL 混合液测定。
酶活计算公式：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、按样本蛋白浓度计算：
酶活性定义：
每毫克蛋白每分钟氧化 1nmol 愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP 活性（nmol/min/mg prot)= [ΔA×V 反总÷ (ε×d）×10⁹]÷(V 样×Cpr) ÷T=413×ΔA÷Cpr
2、按照样本质量计算
酶活性定义：
每克样品每分钟氧化 1nmol 愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP 活性（nmol/min/g 鲜重）= [ΔA×V 反总÷ (ε×d）×10⁹] ÷（V 样×W÷V样总)
T=413×ΔA÷W
3、按照细胞数量计算
酶活性定义：
每 10⁴个细胞每分钟氧化 1nmol 愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP 活性（nmol/min/10⁴ cell）=[ΔA×V 反总÷ (ε×d）×10⁹] ÷（V 样×细胞数量÷)V 样总
÷T= 413×ΔA÷细胞数量
4、 按照液体体积计算
酶活性定义：
每毫升培养液每分钟氧化 1nmol 愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP活性(nmol/min/mL)= [ΔA×V 反总÷ (ε×d）×10⁹]÷V 样÷T= 413×ΔAε ：愈创木酚摩尔d：比
色皿 光径，1cm ；V 反总：反应总体积，2×10⁴ L；消光系数：V 样： 反应中样本体积，0.02mL；
加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mLW：样本质量，g；T：反应时间，2min
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
1、按照蛋白浓度计算
酶活性定义：
每毫克蛋白每分钟氧化 1nmol 愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP 活性(nmol/min/mg prot)= [ΔA×V 反总÷ (ε×d）×10⁹]÷(V 样×Cpr)÷T=826×ΔA÷Cpr
2、按照样本质量计算
酶活性定义：
每克样品每分钟氧化 1nmol 愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP 活性（nmol/min/g 鲜重)= [ΔA×V 反总÷ (ε×d）×10⁹] ÷(V 样×W÷V样总)÷T
=826×ΔA÷W
3、按照细胞数量计算
酶活性定义：
每 10⁴个细胞每分钟氧化 1nmol 愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP 活性(nmol/min/10⁴ cell)=[ΔA×V 反总÷ (ε×d)×10⁹] ÷（V 样×细胞数量÷V 样总)÷T=
826×ΔA÷细胞数量
4 、按照液体体积计算
酶活性定义：
每毫升培养液每分钟氧化 1nmol 愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP 活性(nmol/min/mL)= [ΔA×V 反总÷ (ε×d）×10⁹]÷V 样÷T= 826×ΔA
ε:愈创木酚摩尔消光系数:12100L/mol/cm;d96 孔板光径,0.5cm :V 反总：反应总体积,2×10⁴；V样:反
应中样本体积,0.02mL:V 样总：加入提取液体积,1mL:Cpr:样本蛋白浓度W样本质量,g:T反应时间,2min
