超氧阴离子(OFR)检测试剂盒 ; 100T/96S
测定意义：
生物体内超氧阴离子等活性氧具有免疫和信号传导的作用，但积累过多时会对细胞膜及生物大分子产生破坏作用，导致机体细胞和组织代谢异常，从而引起多种疾病。
测定原理：
超氧阴离子与盐酸羟胺反应生成NO2－，NO2－在对氨基苯磺酸和α-萘胺的作用下，生成红色的偶氮化合物，在530nm 处有特征吸收峰，根据ΔA值可以计算样品中O2－含量，反应式为NH2OH + 2O2－＋H+→NO2－＋H2O2＋H2O。
自备实验用品及仪器：
天平、水浴锅、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、氯仿和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体110mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体20mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体15mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体15mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂四：氯仿，自备。
超氧阴离子提取：
1、植物、动物组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1 ：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后，10000g ，4℃,离心20min，取上清置于冰上待测。
2、细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000 ：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃,离心20min，取上清置于冰上待测。
3、血清或培养液：直接测定。
测定操作表
1、分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至530nm。
2、操作表
超氧阴离子含量计算公式：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y = 0.0242x - 0.0027，R²=0.9980
1、组织：
(1）按照样本质量计算
超氧阴离子含量（nmol/g鲜重）= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V反总÷(V样÷V样总×W)×2=148.76×( ΔA+0.0027)÷W
超氧阴离子产生速率（nmol/ g·min）=148.76×( ΔA+0.0027)÷W÷T =7.44×( ΔA+0.0027)÷W
(2）按照蛋白质浓度计算
超氧阴离子含量（nmol/mg prot）= ( ΔA+0.0027)÷0.0242×V 反总÷(V样×Cpr)×2 =148.76×( ΔA+0.0027) ÷Cpr
超氧阴离子产生速率（nmol/ mg prot ·min）= 148.76×( ΔA+0.0027)÷Cpr÷T =7.44×( ΔA+0.0027)÷Cpr
2、细菌，真菌：
超氧阴离子含量（nmol/10⁴cell）= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V反总÷(V样÷V样总×细胞数量)×2 =148.76×( ΔA+0.0027)÷细胞
数量超氧阴离子产生速率（nmol/10⁴cell ·min）= 148.76×(ΔA+0.0027)÷细胞数量÷T =7.44×( ΔA+0.0027)÷细胞数量
3、血清或培养液
超氧阴离子含量（nmol/mL）= ( ΔA+0.0027)÷0.0242×V反总÷V样×2 =148.76×( ΔA+0.0027)超氧阴离子产生速
率(nmol/mL·min)= 148.76×( ΔA+0.0027) ÷T = 7.44×( ΔA+0.0027)V 样总：加入提取液体积，1mL； V反总：反应总体积,
0.36mL；V样：反应中样品体积，0.2mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g；T：反应时间，20min ；2: 2分子
O2－参与反应生成1分子NO2－。
b. 用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y = 0.0121x - 0.0027，R2 = 0.9980
1、组织：
(1）按照样本质量计算
超氧阴离子含量（nmol/g鲜重）= (ΔA+0.0027)÷0.0121×V反总÷(V样÷V样总×W)×2=297.52×( ΔA+0.0027)÷W
超氧阴离子产生速率（nmol/g ·min）=297.52×( ΔA+0.0027)÷W÷T =14.88×( ΔA+0.0027)÷W
(2）按照蛋白质浓度计算
超氧阴离子含量（nmol/mg prot）= ( ΔA+0.0027)÷0.0121×V反总÷(V样×Cpr)×2 =297.52×( ΔA+0.0027) ÷Cpr 超氧阴离
子产生速率（nmol/ mg prot ·min）= 297.52×( ΔA+0.0027)÷Cpr÷T =14.88×( ΔA+0.0027)÷ Cpr
2、细菌，真菌：
超氧阴离子含量（nmol/10⁴cell）=( ΔA+0.0027)÷0.0121× V反总÷(V样÷V样总×细胞数量)×2 =297.52×( ΔA+0.0027)÷细胞
数量超氧阴离子产生速率（nmol/10⁴cell ·min）=297.52×(ΔA+0.0027)÷细胞数量÷T =14.88×( ΔA+0.0027)÷细胞数量
3、血清或培养液
超氧阴离子含量（nmol/mL）=( ΔA+0.0027)÷0.0121×V反总÷V样×2 =297.52×( ΔA+0.0027)超氧阴离子产生速率（nmol/mL
·min）= 297.52×( ΔA+0.0027) ÷T =14.88×( ΔA+0.0027)V样总：加入提取液体积，1mL；V反总：反应总体积，0.36mL；
v样：反应中样品体积，0.2mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g；T：反应时间，20min；2 ：2分子 O2－
参与反应生成1分子NO2－。
注意事项：
1、OD值大于1，样品适当稀释再测定，注意计算公式里乘以稀释倍数。
2、样品制备好后，立刻进行测定，请勿将样品进行长时间的低温保存，以免影响测定结果。
3、试剂四有一定的毒性，请操作时做好防护措施。
