超氧阴离子(OFR)检测试剂盒 ; 50管/48样

超氧阴离子(OFR)检测试剂盒 ; 50管/48样

测定意义： 

生物体内超氧阴离子等活性氧具有免疫和信号传导的作用，但积累过多时会对细胞膜及生物大分子产生破坏作用，导致机体细胞和组织代谢异常，从而引起多种疾病。

测定原理： 

超氧阴离子与盐酸羟胺反应生成NO2－，NO2－在对氨基苯磺酸和α-萘胺的作用下，生成红色的偶氮化合物，在530nm处有特征吸收峰，根据ΔA值可以计算样品中O2－含量，反应式为NH2OH + 2O2－＋H+→ NO2-+H2O2＋H2O。

自备实验用品及仪器：

天平、水浴锅、离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、氯仿和蒸馏水。

试剂组成和配制：

提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体25mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体20mL×1瓶，4℃避光保存。

试剂三：液体20mL×1瓶，4℃避光保存。

试剂四：氯仿，自备。

超氧阴离子提取：

1、植物、动物组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1 ：5~10 的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃, 离心20min，取上清置于冰上待测。

2、细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000 ：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液）， 冰浴超声波破碎细胞（功率300w ，超声 3 秒， 间隔7秒，总时间3min）； 然后10000g ，4℃, 离心20min，取上清置于冰上待测。

3、血清或培养液：直接测定。

测定操作表

超氧阴离子含量计算公式：

标准曲线：y = 0.0242x - 0.0027，R²=0.9980

1、组织：

(1）按照样本质量计算

      超氧阴离子含量(nmol/g鲜重)= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V反总÷(V样÷V样总×W)×2 =148.76×( ΔA+0.0027)÷W

      超氧阴离子产生速率（nmol/ g·min）=148.76×(ΔA+0.0027)÷W÷T=7.44× ( ΔA +0.0027)÷W

(2）按照蛋白质浓度计算

       超氧阴离子含量（nmol/mg prot）= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V 反总÷(V 样×Cpr)×2=148.76×(ΔA+0.0027)÷Cpr

       超氧阴离子产生速率（nmol/ mg prot·min）= 148.76×(ΔA+0.0027)÷Cpr÷T=7.44× (ΔA+0.0027)÷Cpr

2、细菌，真菌：

     超氧阴离子含量（nmol/10⁴cell）= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V反总÷(V样÷V样总×细胞数量)×2= 148.76×(ΔA+0.0027)÷细胞数量

     超氧阴离子产生速率（nmol/10⁴cell·min）= 148.76×(ΔA+0.0027)÷细胞数量÷T=7.44× (ΔA+0.0027)÷细胞数量

3、血清或培养液

     超氧阴离子含量（nmol/mL）= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V反总÷V样×2=148.76× (ΔA+0.0027)

     超氧阴离子产生速率（nmol/mL·min）= 148.76× (ΔA+0.0027) ÷T= 7.44× (ΔA+0.0027)V样总：加入提取液体积，1mL；V

     反总：反应总体积，0.9mL；V样：反应中样品体积，0.5mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g；T：反应时间，

     20min ；2 ：2分子O2－参与反应生成 1 分子 NO2 -。

注意事项：

1、吸光值大于2，样品适当稀释再测定，注意计算公式里乘以稀释倍数。

2、样品制备好之后，立刻进行测定，请勿将样品进行长时间的低温保存，以免影响测定结果。

3、试剂四有一定的毒性，请操作时做好防护措施。