植酸酶(phytase)检测试剂盒 ; 100T/48S
测定意义：
植酸酶（phytase）是催化植酸及其盐类水解为肌醇与磷酸（盐）的一类酶的总称，属磷酸单酯水解酶，它能将食品和饲料中植酸及其盐转化为可供有机体利用的有效磷，降低粪便中的磷含量，减轻对环境的污染，改善营养成分的吸收和利用，因此具有极其广泛的研究和应用价值。
测定原理：
植酸酶在一定温度和 pH 值条件下，水解底物植酸钠生成无机磷与肌醇衍生物，无机磷在酸性环境中与钼酸铵显色剂反应生成蓝色复合物，在 700nm 处有特征吸收峰，根据 700nm 处吸光值变化可计算得植酸酶活性。
自备实验用品及仪器：
天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、恒温水浴锅，超声溶解器，回旋式振荡器。
试剂组成和配制：
提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。
缓冲液：液体 15mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂×1 支，4℃保存，临用前加缓冲液 6mL 配制，现用现配；用不完的试剂 4℃保存一个月。
试剂二：液体 15mL×1 瓶，4℃保存。
显色剂：粉剂×8 瓶，4℃保存，临用前根据用量每瓶加 0.4mL 双蒸水溶解，再加 1.6mL 试剂二混匀。
样品处理：
1、酶制剂：按照质量（g）：提取液体积(mL)为 1 ：500~1000 的比例（建议称取约 0.001g ，加入 1mL 提取液）加入提取液，在超声波溶解器上溶解 15min ，再用回旋式振荡器振荡 15min，待测。
2、组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为 1 ：5~10 的比例（建议称取约 0.1g ，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，在超声波溶解器上溶解 15min ，再用回旋式振荡器振荡 15min ，4℃, 4000g 离心 10min ，取上清待测。
3、饲料样品：饲料烘干粉碎，过 40 目筛，按照质量（g）：提取液体积(mL)为 1 ：5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，在超声波溶解器上溶解 15min，再用回旋式振荡器振荡 15min， 4℃, 4000g 离心 10min，取上清待测。
4、培养液等液体样品，混匀直接测定。
测定操作表：
| 对照管 | 测定管 |
样本(μL） | 30 | 30 |
37℃温育5min |
缓冲液(µL） | 120 | |
试剂一 (µL） | | 120 |
混匀，37℃温育 30min |
95℃, 10min 终止反应，冷却至室温 |
显色剂(µL） | 150 | 150 |
混匀，37℃静置 15min ，10000g，室温，离心 5min ，取上清 200µL ，测定 700nm处吸光值，△A=A 测定管-A 对照管。每个测定管设一个对照管。 |
酶活性计算公式：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y = 0.2764x + 0.0082 ，R²= 0.9998；x 为标准品浓度(μmol/mL），y 为吸光值。
(1) 按照蛋白浓度计算
酶活性定义：
在 37℃,pH5.5 的条件下,每毫克蛋白每分钟从 5mmol/L 的植酸钠溶液中释放出1μmol的无机磷为一个酶活力单位
植酸酶活性(μmol/min/mg prot）= (△A-0.0082）÷0.2764÷Cpr÷T =0.1206× (△A-0.0082）÷Cpr
(2) 按照样本质量计算
酶活性定义：
在37℃,pH5.5 的条件下,每克样本每分钟从 5mmol/L 的植酸钠溶液中释放出1μmol 的无机磷为一个酶活力单位。
植酸酶活性(μmol/min /g 鲜重）= (△A-0.0082）÷0.2764÷W÷T =0.1206× (△A-0.0082）÷W
(3) 培养液等液体样品
酶活性定义：
在37℃,pH5.5的条件下,每毫升液体每分钟从5mmol/L的植酸钠溶液中释放出1μmol 的无机磷为一个酶活力单位
植酸酶活性(μmol/min /mL）= (△A-0.0082）÷0.2764÷T =0.1206× (△A-0.0082）
Cpr：样本蛋白含量，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，30min。
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y = 0.1382x + 0.0082 ，R² = 0.9998；x 为标准品浓度(μmol/mL），y 为吸光值。
(1) 按照蛋白浓度计算
酶活性定义：
在37℃,pH5.5 的条件下,每毫克蛋白每分钟从,5mmol/L的植酸钠溶液中释放出1μmol的无机磷为一个酶活力单位
植酸酶活性(μmol/min/mg prot）= (△A-0.0082）÷0.1382÷Cpr÷T = 0.2412× (△A-0.0082）÷Cpr
(2) 按照样本质量计算
酶活性定义：
在 37℃,pH5.5 的条件下,每克样本每分钟从5mmol/L 的植酸钠溶液中释放出 1μmol 的无机磷为一个酶活力单位
植酸酶活性(μmol/min /g 鲜重）= (△A-0.0082）÷0.1382÷W÷T =0.2412× (△A-0.0082）÷W
(3) 培养液等液体样品
酶活性定义：
在37℃,pH5.5 的条件下,每毫升液体每分钟从5mmol/L的植酸钠溶液中释放出1μmol 的无机磷为一个酶活力单位
植酸酶活性(μmol/min /mL)=(△A-0.0082)÷0.1382÷T =0.2412×(△A-0.0082)Cpr:样本蛋白含量,mg/mL,
W：样本质量，g；T：反应时间，30min。
注意事项：
1、显色剂需要临用前根据用量配制，每一瓶是 13 个样本的用量，新配制的显色剂若有颜色则已经污染或者试剂过期，应放弃使用。
2、ΔA 线性范围为 0.01-1。
