2、组织样本简便操作表:
| 对照管 | 测定管 |
组织匀浆(ml) | | a |
混合试剂(ml) | 3.5 | 3.5 |
旋涡混匀器充分混匀,37℃水浴30分钟 |
试剂四(ml) | 0.1 | 0.1 |
组织匀浆(ml) | a | |
试剂五(ml) | 0.2 | 0.2 |
混匀,放置10分钟,波长 520nm,1cm光径,双蒸水调零,测定各管吸光度值。 |
附录Ⅰ:T-AOC测定样本前处理
1、血浆样本前处理:
血浆在测试前3500转/分离心10分钟,取上清待测,否则有些抗凝剂会引起沉淀及混浊,肝素抗凝的血浆不要离心,血清不需要离心。
2、组织样本的前处理:
组织匀浆的制备:
准确称取组织重量,按重量(g):体积(ml)=1:9的比例,加入9倍体积的生理盐水,冰水浴条件下,制备成10%的匀浆液,2500转/分离心10分钟,取上清液待测。同时用考马斯亮蓝法测定匀浆蛋白浓度。
3、培养细胞的前处理:
培养细胞悬液的制备:
将培养细胞消化,离心,弃上清,留下层细胞,用生理盐水或匀浆介质制备成107/cm3的悬液,即10⁷/ml的悬液,再进行破碎。破碎细胞的方法有三种:
1、用匀浆器匀浆。(可以用匀浆机,也可以用玻璃匀浆器手工匀浆。)
2、用进口的超声粉碎器粉碎。
3、反复冻溶3次。(第③种方法有时会影响酶活力。)制备好的细胞悬液不需要离心,在测试加样前要摇匀后取样。同时用考马斯亮兰试剂测定组织蛋白。
4、培养细胞的上清及部分体液均可以按照血清样本处理,一般直接加样。
5、全血样本前处理:一般用双蒸水10倍稀释,具体稀释倍数及取样量要做预试。
试剂组成和配制: