测定意义：
测定对象中各种抗氧化物质和抗氧化酶等构成总抗氧化水平。在生物学、医学和药学研究中常常检测血浆、血清、唾液、尿液等各种体液，细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液及各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力。
测定原理：
在酸性环境下，物质还原 Fe³+-三吡啶三吖嗪(Fe³+-TPTZ)产生蓝色的 Fe²+-TPTZ的能力反映了其总抗氧化能力。
自备实验用品：
可见分光光度计、恒温水浴锅、低温离心机、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体60mL×1瓶，使用前预冷。
试剂一：液体50mL×1瓶，避光保存。
试剂二：液体5mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体5mL×1瓶，避光保存。
样品的制备：
(1) 血清、血浆、唾液或尿液样品
血浆（制备时可以使用肝素或柠檬酸钠抗凝，不宜使用EDTA 抗凝）4℃ , 5000rpm 离心 10min ，取上清待测。血清、唾液或尿液样品直接用于测定，也可以-80℃冻存（不宜超过30 d）后再测定。
(2) 组织样品
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1 ：5~ 10 的比例（建议称取约 0. 1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g ，4℃离心10min ，取上清，置冰上待测。
(3) 细胞样品
按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~ 1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎（功率200W ，超声3s ，间隔10s ，重复30次）； 10000g ，4℃离心10min ，取上清，置冰上待测。
操作步骤：
混合液(现配现用)：将试剂一、试剂二、试剂三按 10:1:1 的比例混合，使用前预温至37℃。
| 空白管 | 测定管 |
混合液 (μL） | 900 | 900 |
样品 (μL） | | 30 |
双蒸水 (μL） | 120 | 90 |
充分混匀，反应 20min ，双蒸水调零，1mL玻璃比色皿，测定 593nm处吸光值，△A= A测定-A空白 |
注 意：空白管只需测定一次。
总抗氧化能力计算：
1、定义：
样品的抗氧化能力以达到同样吸光度变化值 (△A）所需的标准液离子浓度表示。标准曲线y=0.8442x-0.0048 ，R²=0.9979
2、计算公式：
(1) 按蛋白浓度计算
单位定义：
每mg蛋白每分钟产生1μmolFe²+-TPTZ定义为一个酶活力单位。
总抗氧化能力（U/mgprot）= (△A+0.0048）÷0.8442×1000×V样÷(V样×Cpr)÷T=59.228×(△A+0.0048）÷Cpr
(2) 按样品质量计算
单位定义：
每g样本每分钟产生1μmolFe²+-TPTZ 定义为一个酶活力单位。
总抗氧化能力（U/g鲜重）= (△A+0.0048）÷ 0.8442×1000×V样÷(V样÷V样总×W)÷T=59.228× (△A+0.0048）÷W
(3) 按细胞数量计算
单位定义：
每万个细胞每分钟产生1μmolFe²+-TPTZ定义为一个酶活力单位。
总抗氧化能力（U/10⁴cell）= (△A+0.0048）÷0.8442×1000×V 样÷（V样÷V样总×细胞数量（万个）÷T =59.228×
(△A+0.0048）÷ 细胞数量（万个）
(4）按液体体积计算
单位定义：
每毫升样本每分钟产生1μmolFe²+-TPTZ 定义为一个酶活力单位。
总抗氧化能力（U/mL）= (△A+0.0048）÷0.8442×1000÷T= 59.228× (△A+0.0048）V 样总：加入提取液体积，1mL； V样：
反应中样品体积，0.03mL；T：反应时间，20min；W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL。
注意事项：
1、试剂二对人体有刺激性，请采取适当的防护措施。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴乳胶手套操作。
2、尽量避免使用在酸性条件下呈蓝色或接近蓝色的试剂，否则对本试剂盒的检测结果产生干扰。
3、样品中不宜添加Tween 、Triton和NP-40等去垢剂和DTT 、巯基乙醇等影响氧化还原反应的还原剂。
