甜菜碱含量检测试剂盒 ; 100T/96S
测定意义：
甜菜碱是一种广泛分布于动植物及微生物体内的季铵型水溶性生物碱，是生物体内胆碱的氧化产物，可以增强免疫力、降血脂、抗氧化、抗肿瘤，并可作为甲基供体，参与促进动物蛋白质和脂肪代谢、增进食欲、缓和应激、调节渗透压、稳定维生素等多种生物作用，在化工、医药、食品添加剂等领域有较广泛的应用。
测定原理：
甜菜碱在强酸条件下和雷氏盐发生反应产生沉淀，沉淀用丙酮溶解形成红色溶液，在 525nm 处有特征吸收峰，测定 525nm 处的吸光值，可计算得样品的甜菜碱含量。
需自备的仪器和用品：
天平、离心机、酶标仪、96 孔板、乙醚、盐酸、丙酮和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体 30mL×1 瓶 ，4℃保存；
试剂一：粉剂×3 瓶，4℃保存；临用前根据用量配制，每瓶加 20mL 蒸馏水溶解，加 390μL 浓盐酸调 pH为 1。
试剂二：99%乙醚，自备。取无水乙醚 59.4mL ，加入蒸馏水 0.6mL，混匀。
试剂三：70%丙酮，自备。（易挥发，根据用量自备，丙酮：蒸馏水=7:3）。
甜菜碱提取：
取烘干后过 40 目筛的样品约 0.02g ，加 0.8mL 水，置于 60℃提取 30min ，期间不断震荡。再加入 200µL 提取液，混匀后 10000g ，25℃ , 离心 10min，取上清液。
测定操作表：
1、酶标仪预热 30min ，调节波长至525nm。
2、操作表
| 空白管 | 测定管 |
上清液(µL） | | 300 |
蒸馏水(µL） | 300 | |
试剂一 (µL） | 500 | 500 |
充分混匀，4℃中反应 2h ，12000rpm ，25℃ , 离心 10min，弃上清 |
试剂二(µL） | 500 | 500 |
混匀，12000rpm ，25℃ , 离心 10min，弃上清。置于通风橱使残余乙醚自然挥发干净 |
试剂三(µL） | 300 | 500 |
震荡使沉淀充分溶解，取 200µL 于 96 孔板，记录标准管和测定管 525nm 处吸光值 A 测定与 A 空白。ΔA=A 测定管-A 空白管。 |
甜菜碱含量计算公式：
标准条件下测定的回归方程为 y = 0.502x + 0.0057 ，R²= 0.9993 ；x 为甜菜碱浓度（mg/mL），y 为吸光值。甜菜碱含量（mg/g干重）=(ΔA-0.0057）÷ 0.502× V标准÷(V 样÷V 样总×W)=1.99× (ΔA-0.0057）÷WV 标准：标准品体积，0.3mL；V 样：反应中样本体积，0.3mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g
注 意：
1、极少数样本在 60℃水浴 20min 后会出现沉淀，可经过 8000g 25℃离心 10min 后，取上清检测，例如成熟的水稻叶片样本。
2、为确保检测准确性，若ΔA 大于1 ，将样本用提取液稀释2~10倍后重新检测，计算公式乘以相应稀释倍数。
