研究意义：
测定对象中各种抗氧化物质和抗氧化酶等构成总抗氧化水平。在生物学、医学和药学研究中常常检测血浆、血清、唾液、尿液等各种体液，细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液及各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力。
测定原理：
在酸性环境下，还原 Fe³+-三吡啶三吖嗪(Fe³+-TPTZ)产生蓝色的 Fe²+-TPTZ的能力反映了总抗氧化能力。
自备实验用品：
恒温水浴锅、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
提取液：液体100mL×1瓶，使用前预冷。
试剂一：液体15mL×1瓶，避光保存。
试剂二：液体1.5mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体1.5mL×1瓶，避光保存。
混合液(现配现用)：将试剂一、试剂二、试剂三按 10:1:1的比例混合，使用前37℃预温。
样品的制备：
(1) 血清、血浆、唾液或尿液等液体样品
血浆（制备时可以使用肝素或柠檬酸钠抗凝，不宜使用EDTA抗凝）4℃ , 5000rpm离心10min，取上清待测。血清、唾液或尿液样品直接用于测定，也可以-80℃冻存（不宜超过30d）后再测定。
(2) 组织样品
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1 ：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
(3) 细胞样品
按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为 500~1000 ：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎（功率200W，超声3s，间隔 10s，重复 30 次）； 10000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
操作步骤：
1、分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至593nm，蒸馏水调零。
2、操作表。
| 空白管 | 测定管 |
混合液(μL） | 180 | 180 |
样品(μL） | | 6 |
双蒸水(μL） | 24 | 18 |
充分混匀，反应 20min，于微量石英比色皿/96 孔板，测定 593nm 吸光值，△ A= A 测定-A 空白 |
注 意：空白管只需测定一次。
总抗氧化能力计算公式：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y=0.8442x-0.0048 ，R2=0.9979
(1）按样本质量计算
单位定义：
每g样本每分钟产生1μmolFe²+-TPTZ 定义为一个酶活力单位。
总抗氧化能力（U/g 鲜重）= ( △ A+0.0048）÷ 0.8442×1000×V 样÷(V 样÷V 样总×W)÷T =59.228× ( △ A+0.0048）÷W
(2）按样本蛋白浓度计算
单位定义：
每mg蛋白每分钟产生1μmolFe²+-TPTZ 定义为一个酶活力单位。
总抗氧化能力（U/mg prot）= ( △ A+0.0048）÷0.8442×1000×V 样÷(V 样÷V 样总×Cpr)÷T =59.228× ( △ A+0.0048）÷Cpr
(3）按细胞计算
单位定义：
每万个细胞每分钟产生 1μmolFe²+-TPTZ 定义为一个酶活力单位。
总抗氧化能力(U/10⁴cell）= ( A+0.0048)÷0.8442×1000×V 样÷(V 样÷V 样总×细胞数量(万个)÷T= 59.228× (△ A+0.0048)
细胞数量(万个）
(4）按液体体积计算
单位定义：
每毫升样本每分钟产生1μmolFe²+-TPTZ 定义为一个酶活力单位。总抗氧化能力（U/mL）= ( △ A+0.0048）
÷0.8442×1000÷T= 59.228×( △ A+0.0048）V 样总：加入提取液体积，1 mL；V 样：反应中样品体积，6μL；T：反应时间，
20min；W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL
b. 用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y= 0.4221x- 0.0048 ；R2=0.9979
(1）按样本质量计算
单位定义：
每g样本每分钟产生1μmolFe²+-TPTZ定义为一个酶活力单位。
总抗氧化能力（U/g鲜重）= ( △ A+0.0048）÷0.4221×1000×V样÷(V样÷V样总×W)÷T =118.455× ( △ A+0.0048）÷W
(2）按样本蛋白浓度计算
单位定义：
每mg蛋白每分钟产生1μmolFe²+-TPTZ 定义为一个酶活力单位。
总抗氧化能力（U/mg prot）= ( △ A+0.0048）÷0.4221×1000×V 样÷(V 样÷V 样总×Cpr)÷T =118.455× ( △ A+0.0048）
÷Cpr
(3) 按细胞计算
单位定义：
每万个细胞每分钟产生 1μmolFe²+-TPTZ 定义为一个酶活力单位。
总抗氧化能力（U/10⁴cell）= ( △ A+0.0048）÷0.4221×1000×V 样÷（V 样÷V 样总×细胞数量（万个））÷T= 118.455×
( △A+0.0048）÷ 细胞数量（万个）
(4）按液体体积计算
单位定义：
每毫升样本每分钟产生1μmolFe²+-TPTZ 定义为一个酶活力单位。总抗氧化能力（U/mL）=(△ A+0.0048)÷0.4221 ×1000÷T
= 118.455×( △ A+0.0048)V 样总：加入提取液体积，1mL；V样：反应中样品体积，6μL；T：反应时间，20min；W：样品
质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL
注意事项：
1、试剂二对人体有刺激性，请采取适当的防护措施。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴乳胶手套操作。
2、尽量避免使用在酸性条件下呈蓝色或接近蓝色的试剂，否则对本试剂盒的检测结果产生干扰。
3、样品中不宜添加 Tween 、Triton 和NP-40等去垢剂和DTT、巯基乙醇等影响氧化还原反应的还原剂。
