乙酸激酶(ACK)检测试剂盒 ; 50管/48样
测定意义：
ACK 主要存在于微生物中，催化乙酸和 ATP 生成乙酰磷酸和 ADP,是细菌碳代谢和能量代谢的关键酶，尤其是在古细菌甲烷合成代谢中起着中枢作用。
测定原理：
(1) ACK 催化乙酸钠和 ATP 生成乙酰磷酸和 ADP ，
(2) 丙酮酸激酶催化 ADP 和 PEP 生成 ATP 和丙酮酸，
(3) 乳酸脱氢酶催化丙酮酸和 NADH 生成乳酸和 NAD+ ，
(4) 在 340nm 下测定 NADH 氧化生成 NAD+速率，即可反映 ACK 活性。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水
试剂组成和配制：
提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体 60mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×2 瓶，-20℃保存；
试剂三：液体 1.2mL×1 支，4℃保存；
样本的前处理：
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：提取液体积（mL）为 500~1000 ：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W ，超声 3s ，间隔 10s ，重复 30 次）；15000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1 ：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2、样本测定
(1) 工作液的配置：临用前取试剂二一瓶，加入 25mL 试剂一和500μL 试剂三，充分混合溶解，置于 37 ℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 5min；现配现用；
(2) 在 1mL 石英比色皿中加入 100μL 样本和 900 μL 工作液，混匀，立即记录 340nm 处 20s 时的吸光值A1 和 3min20s 后的吸光值 A2 ，计算 ΔA=A1-A2。
ACK 活性计算：
(1) 按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：
每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
ACK（nmol/min /mg prot）=[ΔA×V 反总÷ (ε×d）×10⁹]÷(V 样×Cpr) ÷T=536×ΔA÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算：
单位的定义：
每 g 组织每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
ACK（nmol/min /g 鲜重）= [ΔA×V 反总÷ (ε×d）×10⁹]÷(W× V 样÷V 样总) ÷T=536×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：
每 1万个细菌或细胞每分钟消耗1nmol的NADH 定义为一个酶活力单位。
ACK(nmol/min /10⁴cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×10⁹]÷(500×V 样÷V样总)÷T=1.072×ΔAV反总:反应体系总,1×
10³L;ε :NADH 摩尔消光系数,6.22×10³L/mol /cm;d：比色皿光径,1cm;V样：加入样本体,0.1mLV样总加入提取
液体积,1 mL;T;反应时间,3 min;Cpr:样本蛋白质浓度mg/mL;W;样本质量, g;500细菌或细胞总数,500万。
