乙酸激酶(ACK)检测试剂盒 ; 100管/96样
测定意义：
ACK 主要存在于微生物中，催化乙酸和 ATP 生成乙酰磷酸和 ADP ，是细菌碳代谢和能量代谢的关键酶，尤其是在古细菌甲烷合成代谢中起着中枢作用。
测定原理：
(1) ACK 催化乙酸钠和 ATP 生成乙酰磷酸和 ADP ，
(2) 丙酮酸激酶催化 ADP 和 PEP 生成 ATP 和丙酮酸，
(3) 乳酸脱氢酶催化丙酮酸和 NADH 生成乳酸和 NAD+ ，
(4) 在 340nm 下测定 NADH 氧化生成 NAD+速率，即可反映 ACK 活性。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水
试剂组成和配制：
提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体 30mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×2 瓶，-20℃保存；
试剂三：液体 500 μL×1 支，4℃保存；
粗酶液提取：
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为 500~1000 ：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W ，超声 3s ，间隔 10s ，重复 30 次）；15000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1 ：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2、样本测定
(1) 工作液的配置：临用前取试剂二一瓶，加入 10mL 试剂一和 200μL 试剂三，充分混合溶解，置于 37 ℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 5min；现配现用；
(2) 在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 20μL 样本和 180 μL 工作液，混匀，立即记录 340nm 处 20s 时的吸光值 A1 和 3min20s 后的吸光值 A2 ，计算 ΔA=A1-A2。
ACK 活性计算：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
(1) 按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：
每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
ACK（nmol/min /mg prot）=[ΔA×V 反总÷ (ε×d）×10⁹]÷(V 样×Cpr) ÷T=536×ΔA÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算：
单位的定义：
每 g 组织每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
ACK（nmol/min /g鲜重）= [ΔA×V 反总÷ (ε×d）×10⁹]÷(W× V 样÷V 样总) ÷T=536×ΔA÷W
(3) 按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：
每 1 万个细菌或细胞每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
ACK（nmol/min /10⁴ cell）=[ΔA×V 反总÷ (ε×d）×10⁹]÷(500×V 样÷V 样总) ÷T=1.072×ΔAV 反总：反应体系总体积，
2×10-4 L；ε ：NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d： 比色皿光径， 1cm；V 样：加入样本体积，0.02 mL；
V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，3 min；Cpr：样本蛋白质浓度,mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或
细胞总数，500 万。
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
(1) 按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：
每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
ACK（nmol/min /mg prot）=[ΔA×V 反总÷ (ε×d）×10⁹]÷(V 样×Cpr) ÷T=1072×ΔA÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算：
单位的定义：
每 g 组织每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
ACK（nmol/min /g 鲜重）= [ΔA×V 反总÷ (ε×d）×10⁹]÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T=1072×ΔA÷W
(3) 按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：
每 1 万个细菌或细胞每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
ACK（nmol/min /10⁴ cell）=[ΔA×V 反总÷ (ε×d）×10⁹]÷(500×V 样÷V 样总) ÷T=2.144×ΔAV 反总：反应体系总体积，
2×10-4 L；ε ：NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：96 孔板光径，0.5cm；V样：加入样本体积，0.02 mL；
V 样总：加入提取液体积,1 mL;T：反应时间，3 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞
总数，500 万。
