酪氨酸解氨酶(TAL)检测试剂盒 ; 100管/48样
测定意义：
TAL 广泛存在于植物和微生物中，是苯丙氨酸代谢途径的关键酶之一。TAL 能够跃过肉桂酸-4-羟基化酶（C4H）直接将酪氨酸转化为香豆酸，香豆酸可进一步生成白藜芦醇、柚皮素等具有抗氧化、抗衰老作用的苯丙素类天然产物。
测定原理：
TAL 能够分解酪氨酸产生香豆酸，使反应溶液333nm下的吸光度随反应时间而上升，根据吸光度的变化率可计算出 TAL 活性。
需自备的仪器和用品：
酶标仪、台式离心机、可调式移液器、96 孔板（UV 板）、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体50mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×2 瓶，4℃保存；
试剂三：液体5mL×1瓶，4℃保存；
粗酶液提取：
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000 ：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s ，间隔10s ，重复30次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1 ：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。。
2、血清（浆）果汁等液体样品：直接检测。
测定步骤
1、酶标仪预热30min以上，调节波长至333nm。
2、准备96孔UV板一块（非普通酶标板，普通酶标板只能透过可见光，不能透过紫外光，检测波长小于340nm务必使用UV板）。
3、试剂二的配置：临用前在试剂二瓶中加入10mL 试剂一充分溶解待用（用不完的试剂 4℃保存一周，注意现配现用），在 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴10min 以上。
4、在EP管中依次加入如下试剂表
试剂名称(μL） | 测定管 | 对照管 |
样本上清 | 40 | 40 |
试剂一 | | 300 |
试剂二 | 360 | |
充分混匀，40℃保温 60min |
试剂三 | 20 | 20 |
混匀，10000g 4℃离心5min ，取200μL上清至96孔UV板，333nm下测定吸光值A测定与A对照，ΔA=A测定-A对照 |
TAL活力计算：
1、血清（浆）GOD活力的计算
单位的定义：
每分钟每mL血清（浆）或果汁在每mL反应体系中使333nm处吸光值变化0.005为一个酶活力单位。
TAL（U/mL）=ΔA×V反总÷( V样÷V样总)÷0.005÷T =35×ΔA
2、组织、细菌或细胞TAL活性
(1）按样本蛋白浓度计算：
单位定义：
每分钟每mg组织蛋白在每mL反应体系中使333nm处吸光值变化0.005为一个酶活力单位。
TAL（U/mg prot）=ΔA×V反总÷（V样×Cpr）÷0.005÷T =35×ΔA÷Cpr此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
(2）按样本鲜重计算：
单位定义：
每分钟每g组织在每mL反应体系中使333nm处吸光值变化 0.005为一个酶活力单位。
TAL（U/g鲜重）=ΔA×V反总÷(W×V样÷V样总)÷0.005÷T =35×ΔA÷W
(3）按细菌或细胞密度计算：
单位定义：
每分钟每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中使333nm处吸光值变化0.005为一个酶活力单位。
TAL（U/10⁴cell）=ΔA×V反总÷(500×V 样÷V样总)÷0.005÷T =0.07×ΔAV 反总：反应体系总体积，0.42mL；V样：加入样本
体积，0.04mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，60 min ；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；
500：细胞或细菌总数，500万。
