丙酮酸脱羧酶(PDC)检测试剂盒 ; 50管/48样
测定意义：
PDC 主要存在于酵母中，是乙醇发酵的关键酶之一，催化丙酮酸脱羧生成乙醛。
测定原理：
PDC 催化丙酮酸脱羧生成乙醛，添加乙醇脱氢酶（ADH）来进一步催化 NADH 还原乙醛生成乙醇和NAD+ ；NADH 在 340 nm有吸收峰，而 NAD+没有；通过测定 340 nm 光吸收下降速率，来计算 PDC活性。
自备仪器和用品：
研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计、1mL 石英比色皿、可调式移液枪和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体50mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体36mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体5mL×1 瓶，4℃保存。
试剂四：粉剂×1支，-20℃保存。
试剂五：液体60μL×1支，- 20℃保存。
混合试剂：临用前配制，将试剂四和试剂五转移至试剂三中充分溶解待用，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂六：液体5mL×1瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
1、细菌或细胞处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每 200 万细菌或细胞加入 400μL试剂一，超声波破碎细菌或细胞（功率 200W ，工作 3s ，间歇 10s ，工作 35 次），16000g 4℃离心20min，取上清，置冰上待测。
2、组织处理：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1 ：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL试剂一）进行冰浴匀浆，16000g 4℃离心20min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）等液体样品：直接检测。
PDC测定操作：
1、分光光度计预热 30min ，调节波长到 340 nm，蒸馏水调零。
2、试剂二置于 25℃水浴中预热 30 min。
3、 空白管：依次在1mL石英比色皿中加入100μL蒸馏水、100μL混合试剂、700μL 试剂二和 100μL 试剂六，迅速混匀后于 340nm 比色，记录 15s 和 75s 的吸光值，分别记为 A1 和 A2。
4、测定管：依次在1mL石英比色皿中加入100μL上清液、100μL混合试剂、700μL试剂二和 100μL试剂六，迅速混匀后于340nm比色，记录 15s和75s的吸光值，分别记为A3 和A4。
PDC活性计算公式：
(1) 按照蛋白浓度计算
活性单位定义：
25℃中，每毫克蛋白每分钟催化1nmol NADH 氧化为1个酶活单位。
PDC (nmol/min/mg prot) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V 总×109 }÷(Cpr×V 样) ÷T=1608×[(A3－A4)－(A1-A2)]÷Cpr
(2) 按照样本质量计算
酶活性定义：
每毫克蛋白每分钟水解 α-乙酸萘酯产生 1μmol α-萘酚为一个酶活力单位。
PDC (nmol/min /g 鲜重) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V 总×109 }÷(W×V 样÷V 样总) ÷T=1608×[(A3－A4)－(A1-A2)]÷W
(3) 按细胞数量计算
活性单位定义：
25℃中，每 104 个细胞每分钟催化 1nmol NADH 氧化为 1 个酶活单位。
PDC (nmol/min/104cell) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V 总×109 }÷(细胞数量×V 样÷V 样总) ÷T=1608×[(A3－A4)－
(A1-A2)]÷细胞数量
(4) 按血清(浆)体积计算
活性单位定义：
25℃中，每毫升血清（浆）每分钟催化 1nmol NADH 氧化为 1 个酶活单位。
PDC (nmol/min /mL) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V 总×109 }÷V样÷T=1608×[(A3－A4)－(A1-A2)]ε：NADH 摩尔消光系数
6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 总：反应体系总体积，1mL=0.001 L ，V 样：加入反应体系中上清液体积，0.1
mL；Cpr：蛋白浓度（mg/mL），需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量试剂盒；W：样本质量g ；V 样总：加入提取
液体积，1mL；T：反应时间，1 min。
