异柠檬酸裂解酶(ICL)检测试剂盒 ; 100管/96样
测定意义：
ICL（EC4.1.3.1 ）主要存在于植物和微生物中，油料作物种子在萌发过程中，通过乙醛酸循环及其他过程将脂肪转变成碳水化合物。ICL 是乙醛酸循环的关键酶之一。
测定原理：
ICL催化异柠檬酸降解为乙醛酸和琥珀酸，乙醛酸和 NADH在LDH的作用下生成乙醇和 NAD ，NADH 在340nm 下有特征吸收峰，监测 340nm 吸光度的减小速率可间接反应 ICL 活性。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水
试剂组成和配制：
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体15mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存；
试剂三：液体360μL×1支，4℃保存；
试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存；
样本的前处理：
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1的比例（建议 500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30次）；15000g 4℃离心 10min ，取上清，置冰上待测。
2 、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1 ：5~10的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2 、样本测定
(1) 工作液的配置，将试剂二和试剂三转移至试剂一中，充分混合溶解，置于 37℃（哺乳动物）或 25℃ （其它物种）水浴 5min；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
(2) 在试剂四中加入 4mL 蒸馏 水，充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
(3) 在微量石英比色皿或 96 孔板中加入10 μ L样本、150 μ L工作液和 40 μ L 试剂四，混匀，立即记录 340nm 处 20s 时的吸光值 A1 和 2min20s后的吸光值 A2，计算 ΔA=A1-A2。
ICL活性计算：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
(1) 按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：
每mg组织蛋白中每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
ICL（nmol/min/mg prot）=[ ΔA×V反总÷(ε×d）×10⁹]÷(V 样×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算：
单位的定义：
每g组织每分钟消耗1 nmol的 NADH定义为一个酶活力单位。
ICL（nmol/min/g鲜重）=[ ΔA×V反总÷(ε×d）×10⁹]÷(W×V样÷V样总)÷T=1608×ΔA÷W
(3) 按细菌或细胞密度计算：
单位的定义 ：
每 1万个细菌或细胞每分钟消耗 1 nmol的 NADH 定义为一个酶活力单位 。
ICL(nmol/min/10⁴cell)=[ ΔA×V 反总÷(ε×d)×10⁹]÷(500×V样÷V样总)÷T=3.215×ΔAV 反总：反应体系总体积，2 ×10-4 L；
ε：NADH 摩尔消光系数，6.22 ×103 L / mol /cm；d：比色皿光径,1cm；V样：加入样本体积，0.01 mL；V 样总：加入提
取液体积，1 mL；T：反应时间，2 min ；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
b. 用96 孔板测定的计算公式如下
(1) 按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：
每 mg 组织蛋白中每分钟消耗 1nmol的 NADH 定义为一个酶活力单位。
ICL（nmol/min/mg prot）=[ ΔA×V反总÷(ε×d）×10⁹]÷(V样×Cpr)÷T=3216×ΔA÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算：
单位的定义：
每 g 组织每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
ICL（nmol/min/g 鲜重）=[ ΔA×V反总÷(ε×d）×10⁹]÷(W×V样÷V样总)÷T=3216×ΔA÷W
(3) 按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：
每 1万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol的 NADH 定义为一个酶活力单位。
ICL(nmol/min /10⁴cell)=[ ΔA×V 反总÷(ε×d）×10⁹]÷(500×V 样÷V样总) ÷T=6.25×ΔAV 反总：反反应体系总体积，
2×10-4L；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：96 孔板光径，0.5cm ；V样：加入样本体积，0.01mL；
V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，2 min ；Cpr ：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或
细胞总数，500万。
