单宁酶(TAN)检测试剂盒 ; 100管/48样
测定意义：
单宁酶全称是单宁酯酰水解酶(Tannase，EC 3.1.1.20)，它可以水解没食子酸单宁中的酯键和缩酚羧键，生成没食子酸和葡萄糖。
测定原理：
使用抗氧化剂没食子酸丙酯（PG）作为单宁酶酶促反应的底物，在270nn下测定底物 PG 反应前后的光密度变化,计算单宁酶酶活力。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔 UV 板、研钵、冰、蒸馏水。
试剂的组成和配制：
试剂一：液体100mL×2瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1支，4℃保存；临用前每支加入6mL试剂一，充分溶解后备用；用不完的试剂4℃保存；
粗酶液提取：
按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1 ：5~10 的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL 试剂一），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
液体样本：直接取上清测定。
测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长到270 nm，蒸馏水调零。
2、加样表
试剂名称(μL） | 对照管 | 测定管 |
95℃水浴 5min 后灭活的粗酶液 | 50 | |
粗酶液 | | 50 |
试剂二 | 50 | 50 |
混匀，40℃准确保温10 min后，置 95℃水浴中10 min（盖紧，防止水分散失），冷却 |
试剂一 | 900 | 900 |
混匀，取200uL至微量石英比色皿或96孔UV板中，270nm处读取各管吸光值。计算ΔA=A对照-A测定。每个测定管需设个一个对照管。 |
注 意：
1、可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液，然后集中进行5min95℃沸水浴处理。
2、务必使用96孔UV板（非普通酶标板，普通酶标板只能透过可见光，不能透过紫外光，检测波长小于340nm务必使用UV板）。
TAN活力单位的计算：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准条件下测定回归方程为 y = 0.0058x + 0.0044，R²= 0.9994；x为PG含量(µmol/L），y为吸光值。
1、按样本体积计算
单位的定义：
40℃下每毫升粗酶液每分钟水解减少0.01µmol 底物PG所需要的酶量定义为一个酶活单位。TAN活性(µmol/min/mL)=(ΔA-
0.0044）÷0.0058÷1000×V反总÷0.01÷V 样÷T=34.48×(ΔA-0.0044）
2、按照蛋白浓度计算
单位的定义：
40℃下每毫克蛋白每分钟水解减少 0.01µmol 底物 PG 所需要的酶量定义为一个酶活单位(U)。TAN 活性((µmol/min/mg prot)=
(ΔA-0.0044）÷0.0058÷1000×V 反总÷0.01÷(V样×Cpr)÷T=34.48×( ΔA-0.0044）÷Cpr
3、按照样本鲜重计算
单位的定义：
40℃下每克样品每分钟水解减少0.01µmol 底物PG所需要的酶量定义为一个酶活单位(U)。 TAN 活性(µmol/min/g鲜重)=(ΔA-
0.0044)÷0.0058÷1000×V反总÷0.01÷(V 样÷V 样总×W)÷T=34.48×(ΔA-0.0044）÷WV 反总：反应体系总体积，1mL； V 样：
加入样本体积，0.05mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，10min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质
量，g。
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
标准条件下测定回归方程为 y = 0.0029x + 0.0044 ，R²= 0.9994；x为PG含量(µmol/L），y 为吸光值。
1、按样本体积计算
单位的定义：
40℃下每毫升粗酶液每分钟水解减少 0.01µmol 底物 PG 所需要的酶量定义为一个酶活单位(U)。 TAN 活性(µmol/min/mL)=(ΔA-
0.0044)÷0.0029÷1000×V 反总÷0.01÷V 样÷T=68.97×(ΔA-0.0044）
2、按照蛋白浓度计算
单位的定义：
40℃下每毫克蛋白每分钟水解减少1µmol底物PG所需要的酶量定义为一个酶活单位(U)。TAN 活性(µmol/min/mg prot)=(ΔA-
0.0044)÷0.0029÷1000×V 反总÷0.01÷(V 样×Cpr)÷T=68.97×(ΔA-0.0044)÷Cpr
3、按照样本鲜重计算
单位的定义：
40℃下每克样品每分钟水解减少0.01µmol底物PG所需要的酶量定义为一个酶活单位(U)。TAN活性(µmol/min/g 鲜重)=(ΔA-
0.0044)÷0.0029÷1000×V 反总÷0.01÷(V 样÷V 样总×W)÷T=68.97×(ΔA-0.0044)÷W V反总：反应体系总体积，1mL；V 样：
加入样本体积，0.05mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，10min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本
质量，g。
