丙酮酸脱羧酶(PDC)检测试剂盒 ; 100T/96S
测定意义：
PDC 主要存在于酵母中，是乙醇发酵的关键酶之一，催化丙酮酸脱羧生成乙醛。
测定原理：
PDC 催化丙酮酸脱羧生成乙醛，添加乙醇脱氢酶（ADH）来进一步催化 NADH 还原乙醛生成乙醇和NAD+；NADH 在 340nm有吸收峰， 而NAD+没有；通过测定340 nm光吸收下降速率， 来计算PDC活性。
自备仪器和用品：
研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、可调式移液枪和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体18mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体2.5mL×1 瓶，4℃保存。
试剂四：粉剂×1支，-20℃保存。
试剂五：液体30μL×1支，- 20℃保存。
混合试剂：临用前配制，将试剂四和试剂五转移至试剂三中充分溶解待用，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂六：液体2mL×1瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
1、细菌或细胞处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每200万细菌或细胞加入400μL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率 200W ，工作 3s ，间歇 10s ，工作 35 次），16000g 4℃离心20min，取上清，置冰上待测。
2、组织处理：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1 ：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL试剂一）进行冰浴匀浆，16000g 4℃离心20min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）等液体样品：直接检测。
PDC测定操作：
1、分光光度计/酶标仪预热30min ，调节波长到 340 nm，蒸馏水调零。
2、试剂二置于25℃水浴中预热 30min。
3、空白管：依次在微量石英比色皿/96 孔板中加入 20μL 蒸馏水、20μL 混合试剂、140μL 试剂二和 20μL试剂六，迅速混匀后于340nm比色，记录15s和75s的吸光值，分别记为 A1 和 A2。
4、测定管：依次在微量石英比色皿/96 孔板中加入 20μL 上清液、20μL混合试剂、140μL 试剂二和 20μL 试剂六，迅速混匀后于 340nm 比色，记录15s和75s的吸光值，分别记为A3和A4。
注 意：空白管只需测定一次。
PDC 活性计算：
a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
(1) 按照蛋白浓度计算
活性单位定义：
25℃中，每毫克蛋白每分钟催化1nmolNADH氧化为1个酶活单位。
PDC (nmol/min/mg prot) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V 总×10⁹ }÷(Cpr×V样) ÷T=1608×[(A3－A4)－(A1-A2)]÷Cpr
(2) 按照样本质量计算
活性单位定义：25℃中，每克组织每分钟催化 1nmol NADH 氧化为1个酶活单位。
PDC (nmol/min /g鲜重) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V 总×10⁹ }÷(W×V样÷V样总) ÷T=1608×[(A3－A4)－(A1-A2)]÷W
(3) 按细胞数量计算
活性单位定义：
25℃中，每10⁴个细胞每分钟催化1nmolNADH氧化为1个酶活单位。
PDC (nmol/min/10⁴cell) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V 总×10⁹ }÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T=1608×[(A3－A4)－(A1-A2)÷
细胞数量
(4) 按血清(浆)体积计算
活性单位定义:
25℃中，每毫升血清(浆)每分钟催化1nmol NADH氧化为1个酶活单位。
PDC (nmol/min/mL) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V 总×10⁹}÷V 样÷T=1608×[(A3－A4)－(A1-A2)]ε：NADH 摩尔消光系数
6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 总：反应体系总体积，0.2mL=2×10-4 L ，V 样：加入反应体系中上清液体积,
0.02mL；V 样总：提取液体积，1 mL；Cpr：蛋白浓度(mg/mL)，需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量试剂盒；
W ：样品质量； T：反应时间，1 min。
b. 使用 96 孔板测定的计算公式如下
(1) 按照蛋白浓度计算
活性单位定义：
25℃中，每毫克蛋白每分钟催化1nmol NADH氧化为1个酶活单位。
PDC (nmol/min/mg prot) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V 总×10⁹ }÷(Cpr×V 样) ÷T=3215×[(A3－A4)－(A1-A2)]÷Cpr
(2) 按照样本质量计算
活性单位定义：
25℃中，每克组织每分钟催化1nmol NADH氧化为1个酶活单位。
PDC (nmol/min /g鲜重) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V 总×10⁹}÷(W×V 样÷V 样总) ÷T=3215×[(A3－A4)－(A1-A2)]÷W
(3) 按细胞数量计算
活性单位定义：
25℃中，每 10⁴个细胞每分钟催化1nmolNADH氧化为1个酶活单位。
PDC (nmol/min/10⁴cell) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V 总×10⁹ }÷(细胞数量×V 样÷V 样总) ÷T=3215×[(A3－A4)－
(A1-A2)]÷细胞数量
(4) 按血清(浆)体积计算
活性单位定义：
25℃中，每毫升血清(浆)每分钟催化1nmol NADH氧化为1个酶活单位。
PDC (nmol/min/mL) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V 总×10⁹ }÷V 样÷T=3215×[(A3－A4)－(A1-A2)]ε：NADH摩尔消光系数,
6.22×10³L/mol/cm；d：96 孔板光径，0.5 cm；V 总：反应体系总体积，0.2mL=2×10-⁴L ，V 样：加入反应体系中上清液体积,
0.02mL；V 样总：提取液体积，1 mL；Cpr：蛋白浓度(mg/mL)，需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量试剂盒；W :
样品质量； T：反应时间，1 min
