酰基转移酶(AAT)检测试剂盒 ; 50管/48样
测定意义：
AAT是一个多功能蛋白大家族，主要负责催化生物体内各种酰基化和去酰基化反应，在基因表达、代谢和信号传导中具有重要作用。
测定原理：
AAT 催化乙酰 CoA 转移乙酰基到丁醇，释放的 CoA还原 DTNB 生成TNB；TNB在 412nm有吸收峰，测定412nm 吸光度增加速率可计算AAT活性。
自备仪器和用品：
研钵、冰、台式离心机、可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿、恒温水浴锅、无水乙醇。
试剂组成和配制：
提取液：液体 50mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体50mL×1瓶，4℃避光保存；
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存。
试剂三：粉剂×1瓶，4℃避光保存。
粗酶液提取：
1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。
2、细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积(mL)为 500~1000：1 的比例（建议 500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声3 秒，间隔7秒，总时间3min)；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3、液体：直接检测。
AAT测定操作：
1、分光光度计预热 30min，调节波长到 412 nm，蒸馏水调零。
2、工作液的配制：临用前在试剂二瓶中加入 45mL 试剂一，充分混匀待用。用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
3、试剂三的配制：临用前加无水乙醇 2.5mL 充分溶解待用，用不完的试剂 4℃保存。
4、空白管：在 Ep 管或 96 孔板中加入 50μL 提取液和 900μL 工作液，充分混匀，35℃反应 15min，加入 50μL试剂三，充分混匀，25℃静置 10min，测定 412nm 处吸光值，记为A空白管。
5、测定管：在 Ep 管或 96 孔板中加入 50μL 样本和 900μL 工作液，充分混匀，35℃反应 15min，加入50μL试剂三，充分混匀，25℃静置 10min，测定 412nm 处吸光值，记为 A 测定管。△A=A 测定管- A 空白管，空白管只要做一管。
AAT活性计算公式：
(1) 按照蛋白浓度计算
活性单位定义：
每毫克蛋白每分钟催化产生 1nmol TNB 定义为一个酶活单位。
AAT (nmol/min /mg prot) = △A ÷（ε×d）×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T = 98.04×△A÷Cpr
(2) 按照样本质量计算
活性单位定义：
每克组织每分钟催化产生 1nmol TNB 定义为一个酶活单位。
AAT (nmol/min /g 鲜重) = △A ÷(ε×d)×V 反总÷(W×V 样÷V样总) ÷T =98.04×△A÷W
(3) 按细胞数量计算
活性单位定义：
每 10⁴个细胞每分钟催化产生 1nmol TNB 定义为一个酶活单位。
AAT (nmol/min /10⁴cell) = △A ÷（ε×d）×V 反总÷(细胞数量×V 样÷V 样总) ÷T= 98.04×△A÷ 细胞数量
(4) 按液体体积计算
活性单位定义：
每毫升样品每分钟催化产生 1nmol TNB 定义为一个酶活单位。
AAT (nmol/min /mL) = △A ÷（ε ×d）×V 反总÷V 样÷T =98.04×△Aε：TNB 消光系数，13600L/mol/cm；V 反总：反应总体积,
1mL；V样：加入反应体系中上清液体积，0.05mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：蛋白含量，mg/mL；W：样本质量，
g；T：反应时间，15min。
