木质素过氧化物酶(LiP)检测试剂盒 ; 100T/96S
测定意义：
木质素过氧化物酶（EC1.11.1.14 ）是一种含亚铁血红素的过氧化物酶，属于木质素降解酶系，在木质素生物降解、造纸工业、纺织工业、芳香化合物转化与降解及环境污染控制等方面具有较大的应用潜力。
测定原理：
木质素过氧化物酶催化天青脱甲基，在 651nm 处测定吸光值减少。
自备实验用品及仪器：
天平、研钵、低温离心机、酶标仪、96 孔板、可调式移液器、冰。
试剂组成和配制：
试剂一：粉剂×1瓶， 4℃保存。临用前加入 115mL 蒸馏水，充分溶解待用，用不完的试剂 4℃保存一个月。
试剂二：液体5mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体5mL×1支，4℃保存。
酶液提取：
1、组织：按照质量（g）：试剂一体积(mL)为 1 ：5~10 的比例（建议称取约 0.1g ，加入 1mL 试剂一）加入试剂一，冰浴匀浆后于 4℃ , 10000g 离心 10min，取上清置于冰上待测。
2、细胞：按照细胞数量（10⁴个）：试剂一体积（mL）为 500~1000 ：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w ，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 4℃ , 10000g离心 10min，取上清置于冰上待测。
3、培养液或其它液体：直接检测。
测定操作：
1、酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 651nm。
2、临用前按每个样本试剂一：试剂二：试剂三=80:40:40 (μL）的比例配制工作液，现配现用。
3、在 96 孔板中依次加入如下试剂
| 测定管 |
样品(μL） | 40 |
工作液(μL） | 160 |
充分混匀，立即测定 651nm 处 10s 和 130s 吸光值，记为 A1 和 A2 ，△A=A1- A2 |
酶活计算公式：
1、按照蛋白浓度计算
酶活性定义：
每mg组织蛋白在每 mL 反应体系中每分钟 A651 变化 0.01 为一个酶活力单位。
LiP 活性（U/mg prot）= ΔA×V 反总÷（V 样×Cpr）÷0.01÷T =250×ΔA÷Cpr
2、按照样本质量计算
酶活性定义：
每 g 组织在每 mL 反应体系中每分钟 A651 变化 0.01 为一个酶活力单位。
LiP 活性（U/g 鲜重）=ΔA×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷0.01÷T =250×ΔA÷W
3、按照细胞数量计算
酶活性定义：
每 1 万个细菌或细胞在每 mL 反应体系中每分钟 A651 变化 0.01 为一个酶活力单位。
LiP 活性（U/10⁴ cell）=ΔA×V 反总÷(500×V 样÷V 样总)÷0.01÷T=0.5×ΔA
4、按照液体体积计算
酶活性定义：
每 mL 血清（浆）在每 mL 反应体系中每分钟 A651 变化 0.01 为一个酶活力单位。
LiP 活性（U/mL）=ΔA×V 反总÷V 样÷0.01÷T =250×ΔA
V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：反应中样本体积，0.04mL；V 样总：加入提取液体积,1mL;Cpr：样本蛋白
浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，2min
