总皂苷含量检测试剂盒 ; 100管/96样
测定意义:
皂苷(Saponin)是苷元为三萜或螺旋甾烷类化合物的一类糖苷,主要分布于陆地高等植物中,也少量存在于海星和海参等海洋生物中。 许多中草药如人参、远志、桔梗、甘草、知母和柴胡等的主要有效成分都含有皂苷。有些皂苷还具有抗菌的活性或解热、镇静、抗癌等有价值的生物活性。
测定原理:
使用超声波提取样品中的皂苷,利用香草醛-高氯酸显色体系测定总皂苷含量。
所需的仪器和用品:
酶标仪、烘箱、水浴锅、可调式移液器、96 孔板、高氯酸、乙酸、超声波清洗器
试剂组成和配制:
提取液:液体 100ml ×1瓶,4℃保存;
试剂一:24ml ×1瓶,4℃保存;
试剂二:高氯酸,自备;
试剂三:乙酸,自备。总皂苷提取:
样本烘干,粉碎过筛,称取 0.05g,加入 1mL 提取液,超声提取 1h ;8000g ,25℃离心 10min,取上清待测。
测定步骤:
1、酶标仪预热 30min以上,调节波长至 589nm。
2、测定管:取 0.5mL上清,70℃挥发至干。加入 0.2mL 试剂一和 0.8mL试剂二,55℃水浴
20min。吸取 40 μL 加入 96 孔板中,再加入 200 μL试剂三,充分混匀后,589nm 下测定吸光度 A1。
3、空白管:取 0.5mL提取液,70℃挥发至干。加入0.2mL 试剂一和 0.8mL试剂二,55℃水浴 20min 。吸取 40 μL 加入 96 孔板中,再加入 200 μL 试剂三,充分混匀后,589nm 下测定吸光度 A2。计算△A= A1-A2。
总皂苷含量计算:
1、以齐墩果酸为对照品计算
标准状态下的回归曲线为:y = 0.0036x - 0.012 ,R² = 0.9968 ,x 为对照品浓度,μg/mL,y 为吸光度△A。
总皂苷含量( μg/g 干重)= (△A+0.012)÷ 0.0036×V样÷(V 样÷V 样总×W)=277.78×(△A+0.012)÷W
2、以人参皂苷 Re 为对照品计算
标准状态下的回归曲线为:y = 1.0233x - 0.0016 ,R² = 0.9983 ,x 为对照品浓度,mg/mL,y 为吸光度△A。
总皂苷含量( μg/g 干重)= (△A+0.0016)÷ 1.0233×V 样÷(V 样÷V 样总×W)×1000=977.23×(△A+0.0016)÷W
V 样:加入样本体积,0.5mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;W:样本干重,g;1000 ,毫克到微克的换算系数。