抗脂质过氧化能力/LPO抑制率检测试剂盒/96样
测定意义：
过氧化脂质具有破坏生物膜的作用，导致细胞破坏、机体损伤。以硫代巴比妥酸(TBA) 法 测定外源添加的脂质过氧化体系的产物丙二醛，形成在535nm 处有特征吸收峰的有色产 物。当加入抗脂质过氧化物质(LPO) 时，它能抑制外源脂质过氧化体系中产物丙二醛的产 生，从而使溶液在535nm 处光吸收减弱。故可以通过测定 A535 值来评价抗脂质过氧化 物质的能力即抑制脂质过氧化 (LPO) 能力。
试剂盒组成和配制：
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
试剂一 | 液体15mL×1瓶 | 4℃保存 | |
试剂二 | 粉剂mg×4支 | 4℃保存 | 临用前甩几下，使粉剂落到底部，每支再加3mL试剂一，超声20min(周围以冷水冷却),是乳白色液体，三天内用完。 |
试剂三 | 液体1mL×1支 | 4℃保存 | 用前用蒸馏水稀释10倍后再使用。 |
标准品 | 液体20mL×1支 | 4℃保存 | 若有沉淀析出，可超声溶解。 |
所需的仪器和用品：
酶标仪、96孔板、可调式移液器、天平、离心机 。
抗脂质过氧化能力(LPO抑制率)：
建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费!
1、样本制备：
① 组织样本：称取0.1g 样本(若是干样可取0.02-0.05g), 加 入1mL 的80%乙醇(自备)进行匀浆，匀浆后转入2mL 离心管中；于50℃,200-300W 条件下超声提取30min
(间隔5min 振荡混匀一次)。若有损耗需用80%乙醇定容至1mL,12000rpm室温离心 1 0min, 取上清待测。
② 液体：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。
2、上机检测：
① 酶标仪预热30min以上，调节波长至535nm。
② 不同样本清除能力不一，可先选取2个样本做检测，在EP管中依次加入下列试剂：
试剂名称(μL) | 测定管 | 空白管 |
样本 | 100 | |
蒸馏水 | | 100 |
试剂二 | 100 | 100 |
试剂三 | 100 | 100 |
混匀，避光于37℃孵育30min |
试剂四 | 200 | 200 |
95℃孵育15min,迅速冷却，5000r/min离心10min,取上清2 0 0 p L 至9 6孔板中，535 nm测定 。 |
注 : 若 A 测定值小于0.15,可对样本用提取液即80%乙醇稀释后再测定；或若 A 测 定大于等于空白管，需加大样本取样质量 W, 则改变后的 D 和 W 需代入公式计算。
结果计算：
抗脂质过氧化能力或 LPO 抑 制 率 % =(A 空白-A 测定)÷A 空白×100%
