乙二醛酶I(Gly I)活性检测试剂盒/48样
测定意义：
乙二醛酶系统是甲基乙二醛 (MG)的主要清除途径，乙二醛酶 I(Gly1,EC4.4.1.5)是一种组成乙二醛酶系统的胞质酶。
乙二醛酶 I(Gly I) 通过催化甲基乙二醛 (MG) 和还原型谷胱甘肽形成 S-D-乳酰谷胱 甘肽(S-D-lactoylglutathione,SLG),SLG在 2 4 0nm 处有特征吸收峰，通过检测240nm 值的增加速率，进而计算出乙二醛酶 I(Gly I) 酶活性的大小。
试剂盒组成和配制：
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
提取液 | 液体60mL×1瓶 | 4℃保存 | |
试剂一 | 液体×2支 | 4℃保存 | 临用前甩几下或离心使液体落入底部，每支再加入1.1mL蒸馏水，混匀备用。 |
试剂二 | 粉体×1支 | 4℃保存 | 临用前甩几下或离心使粉体落入底部，再加入2.2mL蒸馏水，混匀备用。 |
试剂三 | 液体40mL×1瓶 | 4℃保存 |
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所需的仪器和用品：
紫外分光光度计、1mL 石英比色皿(光径1cm)、 可调式移液器、研钵、蒸馏水。
乙二醛酶I(GIyl)活性测定：
建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费!
1、样本制备：
① 组织样本
称取0 . 1g 组织样本(水分充足可取0.2g), 先加入1mL的提取液，冰浴匀浆， 12000rpm,
4℃离心10min, 上清液待测。
注 : 若增加样本量，可按照组织质量 (g): 提取液体积(mL) 为1:5~10的比例进行提 取。
2、上机检测：
① 紫外分光光度计预热30min 以上，调节波长至240nm, 蒸馏水调零。
② 制备反应 mix: 按照试剂一：试剂二：试剂三=10:10:160 的比例混合，避光孵育
10min, 两个小时内用完。
③ 在1mL 石英比色皿(光径1cm)中依次加入下列试剂：
试剂名称(μL) | 测定管 |
反应mix | 650 |
样本 | 70 |
混匀，室温(25℃)下，30s时于40nm处读取吸光值A1,5min后再读取A2。△A=A2-Al。 |
注 :
1、若△A 值在零附近徘徊，可增加反应时间 T (如增至10min 后读取 A2),则改变后的 T 需代入公式计算。
2、若起始值 A1 太大如超过2(如颜色较深的植物叶片，一般色素较高，则起始值相对会偏高),可以对样本用蒸馏水进行稀释(如稀释3倍),则稀释倍数D 需代入计算公式重新计算。
结果计算：
1、按样本蛋白浓度计算：
酶活定义：
每毫克组织蛋白每分钟生成1nmol 的 SLG 定义为一个酶活力单位。
GlyI(nmol/min/mgprot)= [△A÷(ε×d)×10⁹×V2]÷(V1×Cpr)÷T×D=610.4×△A÷Cpr×D
2、按样本鲜重计算：
酶活定义：
每克组织每分钟生成1nmol 的 SLG 定义为一个酶活力单位。
GlyI(nmol/min/g鲜重)=[△A÷(ε×d)×10⁹×V2]÷(W×V1÷V)÷T×D=610.4×△A÷W×D
V¹---加入样本体积，0.07mL;V-- 加入提取液体积，1mL;
V2---反应体系总体积，7.2×10-4 L;d--- 光径，1cm;
W--- 样本质量，g;J--- 反应时间，5min;
E---SLG 的摩尔消光系数，3.37×10³L/mol/cm;D--- 稀释倍数，未稀释即为1。
Cpr--- 蛋白质浓度，mg/mL, 建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
