乙二醛酶I(Gly I)活性检测试剂盒/96样
测定意义：
乙二醛酶系统是甲基乙二醛（MG）的主要清除途径，乙二醛酶 I（Gly I， EC 4.4.1.5）是一种组成乙二醛酶系统的胞质酶。
乙二醛酶 I（Gly I）通过催化甲基乙二醛（MG）和还原型谷胱甘肽形成 S-D-乳酰谷胱甘肽(S-D-lactoylglutathione, SLG) ，SLG 在 240nm 处有特征吸收峰，通过检测 240nm值的增加速率，进而计算出乙二醛酶 I（Gly I）酶活性的大小。
试剂盒组成和配制：
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
提取液 | 4℃保存 | 4℃保存 | |
试剂一 | 液体×1支 | 4℃保存 | 临用前甩几下或离心使液体落入底部，再加入1.1m 蒸馏水，混匀备用。 |
试剂二 | 粉体×1 支 | 4℃保存 | 临用前甩几下或离心使粉体落入底部，再加入1.1mL蒸馏水，混匀备用。 |
试剂三 | 液体20mL×1 瓶 | 4℃保存 |
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所需的仪器和用品：
酶 标 仪、96孔板 (UV板)、可调式移液器、研钵、蒸馏水 。
乙二醛酶I(GIyl)活性测定：
建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费!
1、样本制备：
① 组织样本：
称取 0.1g 组织样本（水分充足可取 0.2g），先加入1mL的提取液，冰浴匀浆，12000rpm， 4℃离心10min，上清液待测。
注：若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为 1 ：5~10 的比例进行提取
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 240nm。
② 制备反应mix：按照试剂一： 试剂二： 试剂三=10:10:160的比例混合， 避光孵育10min, 两个小时内用完。
③ 在 96 孔板（UV 板）中依次加入下列试剂：
试剂名称(μL) | 测定管 |
反应m ix | 180 |
样本 | 20 |
混 匀，室 温 ( 2 5 ℃ ) 下，3 0 s 时 于2 4 0 n m处 读 取 吸光值A 1， 5min后再 读取A 2。ΔA = A 2 - A 1。 |
注 :
1、若ΔA 值在零附近徘徊，可增加反应时间 T（如增至10min 后读取 A2），
则改变后的 T 需代入公式计算。
2、若起始值 A1 太大如超过 2（如颜色较深的植物叶片，一般色素较高，则起始值相对会偏高） ，可以对样本用蒸馏水进行稀释（如稀释 3 倍） ，则稀释倍数 D 需代入计算公式重新计算。
结果计算：
1、按样本蛋白浓度计算：
酶活定义：
每毫克组织蛋白每分钟生成 1nmol 的 SLG 定义为一个酶活力单位。
GlyⅠ（nmol/min/mg prot） =[ΔA÷(ε×d) × 10⁹×V2] ÷ (V1 ×Cpr) ÷T × D=1187 ×ΔA÷Cpr × D
2、按样本鲜重计算：
酶活定义：
每克组织每分钟生成 1nmol 的 SLG 定义为一个酶活力单位。
GlyⅠ（nmol/min/g 鲜重） =[ΔA÷(ε×d) × 10⁹ ×V2] ÷ (W ×V1÷V) ÷T × D =1187 ×ΔA÷W × D
V1---加入样本体积，0.02mL；V---加入提取液体积， 1mL；
V2---反应体系总体积，2 × 10-4 L； d---96 孔板光径，0.5cm；
W---样本质量，g； T---反应时间，5min；
ε---SLG 的摩尔消光系数，3.37 × 10³L/mol/cm；D---稀释倍数，未稀释即为1。
Cpr---蛋白质浓度，mg/mL，建议使用本公司的BCA蛋白含量检测试剂盒。
